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液相色譜分析的關(guān)鍵因素之一便是保留時(shí)間的重現(xiàn)性，今天我們就來(lái)簡(jiǎn)單的聊聊它的一些小問(wèn)題。

Part 01

首先我們來(lái)看幾個(gè)定義

A 保留時(shí)間(Rt)：

被分離樣品組分從進(jìn)樣開(kāi)始到柱后出現(xiàn)該組分濃度極大值時(shí)的時(shí)間，也即從進(jìn)樣開(kāi)始到出現(xiàn)某組分色譜峰的頂點(diǎn)時(shí)為止所經(jīng)歷的時(shí)間。

B 死時(shí)間(t)：

不與固定相作用的組分的保留時(shí)間，即分配系數(shù)為0的組分的保留時(shí)間稱(chēng)為死時(shí)間。

C 折合保留時(shí)間（Rt'）：

扣除死時(shí)間后的保留時(shí)間，某組分由于溶解（或者吸附）于固定相，比不溶解（或者不吸附）的組分在柱中多停留的時(shí)間又稱(chēng)為調(diào)整保留時(shí)間。

在實(shí)驗(yàn)室條件下（溫度、色譜柱等）一定時(shí)，折合保留時(shí)間僅決定于組分的性質(zhì)，因此折合保留時(shí)間是定性的基本參數(shù)。

Part 02

異常問(wèn)題，需排查的幾個(gè)方面：

若保留時(shí)間總是改變，那么這是屬于異常問(wèn)題，可以從多個(gè)方面去排查原因。

保留時(shí)間的改變一般是分為兩種不同的情況：

即保留時(shí)間總是沿單方向發(fā)生變化（時(shí)間或延長(zhǎng)或縮短）和保留時(shí)間無(wú)規(guī)律的左右波動(dòng)。將此兩種情況區(qū)分開(kāi)來(lái)對(duì)待可以更好地理清解決問(wèn)題的思路。例如：色譜柱性能下降的時(shí)候，很少會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間無(wú)規(guī)律的左右波動(dòng)，而是引起保留時(shí)間沿單方向發(fā)生變化。

A 排除實(shí)驗(yàn)室誤差：

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件是否合適穩(wěn)定（室溫變化小于2度），玻璃器皿是否干凈無(wú)污染，是否存在人為失誤，偶然誤差等。

B 流動(dòng)相排查：

關(guān)注流動(dòng)相的有效期，流動(dòng)相組分是否有可能揮發(fā)變化（封口膜），流動(dòng)相平衡時(shí)間是否充足（梯度洗脫未回到初始流動(dòng)相濃度或時(shí)間不夠），流動(dòng)相PH值是否合適（緩沖能力、樣品影響），管路是否被污染，管路有沒(méi)有氣泡，管路是否有漏液（密封墊漏液、排液閥沒(méi)擰緊等），比例閥工作是否正常（注意純有機(jī)試劑與高鹽流動(dòng)相混合的方法）。

C 色譜柱的問(wèn)題（色譜柱性能下降或者被污染）：

性能下降：色譜柱上鍵合的配體有機(jī)長(zhǎng)鏈的穩(wěn)定性是有一定壽命的，即使在合適的PH范圍內(nèi)（常見(jiàn)的硅膠基質(zhì)的色譜柱在pH4左右時(shí)比較合適）。長(zhǎng)期使用后，固定相也會(huì)慢慢水解；即使經(jīng)常沖洗色譜柱亦會(huì)累計(jì)色譜柱的水解。

色譜柱被污染：色譜柱是具有吸附性的，流動(dòng)相帶過(guò)來(lái)的任何污染會(huì)累積到色譜柱上面，如流動(dòng)相瓶/流動(dòng)相，儀器密封墊碎屑，以及樣品等等。特別要注意的是水，是很容易被污染的流動(dòng)相，少量污染物可能最終慢慢富集到色譜柱上，從而引起問(wèn)題，樣品有時(shí)候也是污染的一大來(lái)源，特別是基質(zhì)復(fù)雜的樣品，例如血樣，蛋白樣等。

減少污染的方法，最好是把問(wèn)題處理在前面，它比污染后的清洗更快捷有效，過(guò)濾流動(dòng)相和樣品以及使用預(yù)保護(hù)柱是比較不錯(cuò)的選擇。

因此，在進(jìn)行生物樣品、農(nóng)產(chǎn)樣品、水產(chǎn)樣品、天然藥物等復(fù)雜基質(zhì)的樣品分析時(shí), 為防止大量基質(zhì)進(jìn)入色譜柱造成污染和損傷,使用保護(hù)柱是可行的方法之一，島津提供的保護(hù)柱工具包都包含相應(yīng)的柱芯和一個(gè)柱套連接器，并可以提供復(fù)雜基質(zhì)樣品保護(hù)柱再生系統(tǒng)升級(jí)方案，以滿足長(zhǎng)期使用的需求，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)室效率。

D 液相的泵也有可能存在問(wèn)題：

輸液是否正常，流量是否準(zhǔn)確，壓力是否穩(wěn)定。

這些都是日常作為儀器性能判斷的標(biāo)準(zhǔn)，定期的做儀器性能測(cè)試以及儀器的維護(hù)保養(yǎng)是預(yù)防問(wèn)題發(fā)生的好幫手。

分析儀器是由精密零部件組成的精密機(jī)械，長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)轉(zhuǎn)帶來(lái)的磨損、腐蝕會(huì)造成儀器功能不全和性能下降。這些問(wèn)題可能正在實(shí)驗(yàn)室里發(fā)生，也對(duì)工作效率和儀器壽命產(chǎn)生影響。因此采取積極的應(yīng)對(duì)措施至關(guān)重要！

維護(hù)保養(yǎng)服務(wù)為儀器進(jìn)行專(zhuān)門(mén)的清潔、校正、潤(rùn)滑和測(cè)試，同時(shí)更換易損耗部品。通過(guò)嚴(yán)謹(jǐn)科學(xué)的程序使儀器達(dá)到最佳狀態(tài)，幫助用戶獲得準(zhǔn)確穩(wěn)定的分析結(jié)果，最大限度的減少計(jì)劃外停機(jī)，提升工作效率。