3.3 氣相色譜-質(zhì)譜法
3.3.1 樣品提取
稱取100-110mg植物油于帶有螺旋蓋的玻璃管中，加入50μL內(nèi)標(biāo)工作液和2mL無(wú)水四qing呋喃，渦旋15s使之混勻。加入30μL溴化鈉的酸性水溶液，渦旋后在50oC搖床震蕩反應(yīng)15min。加入3mL 0.6%的碳酸氫鈉溶液以終止反應(yīng)。為了將油脂從水相中分離出來(lái)，往樣品中加入2mL正庚烷，旋渦15s。兩相分離后，將上層液相轉(zhuǎn)移至干凈的玻璃管中，氮吹至干（35-40oC下，15-20min），并用1mL無(wú)水四qing呋喃復(fù)溶。
然后，加入1.8mL硫酸/甲醇溶液，渦旋10s，然后將其置于40oC搖床震蕩反應(yīng)16h。反應(yīng)結(jié)束后，向樣品溶液中加入0.5mL飽和碳酸氫鈉溶液，渦旋10s，以終止反應(yīng)。氮吹至約1mL，以去除有機(jī)溶劑，待凈化。
待凈化液中依次加入2mL硫酸鈉溶液和2mL正庚烷，渦旋10s充分混合。靜置，待兩相自然分層后棄去上層液相（含有脂肪酸甲酯的正庚烷），并用正庚烷重復(fù)提取1次，殘留液待衍生化反應(yīng)。
向殘留液中加入250μL飽和苯基硼酸溶液，渦旋10s，室溫下超聲處理5min。加入1mL正庚烷，渦旋10s，轉(zhuǎn)移上層液相至空瓶；用1mL正庚烷再提取次，混合兩次提取液。氮吹至全干。加入1mL正庚烷復(fù)溶，渦旋10s至充分溶解，濾膜過(guò)濾后轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶待測(cè)。
3.3.2 樣品測(cè)定
氣相色譜條件
色譜柱：聚二甲基硅氧烷毛細(xì)管色譜柱(30m×0.25mm×1.0μm )或相當(dāng)型號(hào)色譜柱。進(jìn)樣量：1.0μL。進(jìn)樣方式：脈沖不分流進(jìn)樣。進(jìn)樣口溫度：250oC。載氣：高純氦氣（純度≥99.999%）。流速：0.8mL/min。升溫程序：80oC保持1min；以10oC/min 的速率升溫至170oC，再以3oC/min 的速率升溫至200oC；然后以15oC/min 的速率升溫至300oC，保持15min。
質(zhì)譜條件
傳輸線溫度：300oC。離子源溫度：230oC。四桿溫度：150oC。離子源：電子轟擊模式（EI）。選擇離子監(jiān)測(cè)模式（SIM）參數(shù)：（1）3-MBPD的苯基硼酸衍生物（m/z）147（定量離子）；240（定性離子）；（2）3-MBPD-d5的苯基硼酸衍生物（m/z）150（定量離子）；245（定性離子）。溶劑延遲時(shí)間：5min。
3.3.3 方法學(xué)驗(yàn)證
3.3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)
配制縮水甘油棕櫚酸酯（Gly-P）與內(nèi)標(biāo)氘代縮水甘油棕櫚酸酯（Gly-P-d5）不同濃度比例的標(biāo)準(zhǔn)溶液（如表4所示），以Gly-P（以Gly計(jì)）與內(nèi)標(biāo)Gly-P-d5（以Gly-d5計(jì)）的質(zhì)量比為橫坐標(biāo)、以3-MBPD定量離子（m/z 147）與3-MBPD-d5定量離子（m/z 150）的峰面積之比為縱坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y=0.7355x+0.0369，計(jì)算得相關(guān)系數(shù)R2=0.9971。
表4 Gly-P與內(nèi)標(biāo)Gly-P-d5濃度的比例
Gly-P
|
Gly-P-d5
| ||
濃度（μg/mL）
|
添加量（μL）
|
濃度（μg/mL）
|
添加量（μL）
|
10
|
25
|
50
|
50
|
10
|
50
|
50
|
50
|
10
|
100
|
50
|
50
|
100
|
20
|
50
|
50
|
100
|
40
|
50
|
50
|
100
|
80
|
50
|
50
|
3.3.3.2 方法回收率及精密度實(shí)驗(yàn)
以不含縮水甘油脂肪酸酯的植物油（特初榨橄欖油）為空白樣品基質(zhì)，分別添加低、中、高3個(gè)濃度水平的Gly-P標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)水平重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)，按照前述方法處理和分析樣品，計(jì)算回收率（如表5所示），平均回收率在83.45%～94.12%，RSD為3.67%~9.04%，回收率和精密度都能滿足分析要求。
表5 加標(biāo)回收率和精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=3）
加標(biāo)量（mg/kg）
|
測(cè)得平均值（mg/kg）
|
平均回收率（%）
|
RSD（%）
|
0.5
|
0.47
|
94.12
|
9.04
|
2
|
1.77
|
88.72
|
6.22
|
6
|
5.01
|
83.45
|
3.67
|
（三）采用標(biāo)準(zhǔn)和*標(biāo)準(zhǔn)的情況，以及與、國(guó)外同類標(biāo)準(zhǔn)水平的對(duì)比，或者與測(cè)試的國(guó)外樣品、樣機(jī)的有關(guān)數(shù)據(jù)對(duì)比情況
本標(biāo)準(zhǔn)等同采用了美國(guó)油脂化學(xué)家學(xué)會(huì)（AOCS）的推薦標(biāo)準(zhǔn)Joint AOCS/JOCS Official Method Cd 28-10《Glycidyl fatty acid esters in edible oils》和AOCS Official Method 29a-13《2- and 3-MCPD fatty acid esters and glycidol fatty acid esters in edible oils and fats by acid transesterification》中食用油脂的縮水甘油脂肪酸酯測(cè)定方法的內(nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布實(shí)施后，將達(dá)到*水平。
（四）與有關(guān)的現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系
本標(biāo)準(zhǔn)頒布實(shí)施后，填補(bǔ)我國(guó)植物油脂中縮水甘油脂肪酸酯測(cè)定方法的空白，更有利于行業(yè)應(yīng)用；與現(xiàn)行的法律、法規(guī)及其他標(biāo)準(zhǔn)沒(méi)有矛盾。
（五）重大分歧意見(jiàn)的處理經(jīng)過(guò)和依據(jù)
無(wú)。
（六）按照標(biāo)準(zhǔn)化法的有關(guān)規(guī)定，提出強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)或推薦性標(biāo)準(zhǔn)的建議
建議將本標(biāo)準(zhǔn)作為糧食行業(yè)推薦標(biāo)準(zhǔn)使用。
（七）廢止現(xiàn)行有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的建議
無(wú)。
（八）其他應(yīng)予說(shuō)明的事項(xiàng)
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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