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細(xì)胞培養(yǎng)常見問(wèn)題解答
閱讀：1213 發(fā)布時(shí)間：2017-9-14
1為什么要在溶解的一周內(nèi)使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液?
答：胰蛋白酶在4℃就可能開始降解，如果在室溫下放置超過(guò)30分鐘，就會(huì)變得不穩(wěn)定。
2怎樣查到一個(gè)特定細(xì)胞株的相關(guān)知識(shí)和培養(yǎng)條件？
答：ATCC(AmericanTypeCultureCollection)收集了絕大多數(shù)細(xì)胞的詳細(xì)資料。打開ATCC網(wǎng)頁(yè)的Cellsandhybridomas鏈接，輸入細(xì)胞名稱就可以搜索ATCC的細(xì)胞數(shù)據(jù)庫(kù)。數(shù)據(jù)庫(kù)中有每一種細(xì)胞的詳細(xì)描述，包括細(xì)胞的來(lái)源，培養(yǎng)和凍存條件，以及相關(guān)文獻(xiàn)等資料。
3支原體(mycoplasma)污染的細(xì)胞，是否能以肉眼觀察出異狀？
答：不能。除極有經(jīng)驗(yàn)之專家外，大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株，無(wú)法以其外觀分辨之。
4細(xì)胞的滲透壓耐受性是多少？
答：細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中，大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)滲透壓有一定耐受性。人血漿滲透壓290mOsm/kg,可視為培養(yǎng)人體細(xì)胞的理想滲透壓。鼠細(xì)胞滲透壓在320mOsm/kg左右。對(duì)于大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞，滲透壓在260-320mOsm/kg的范圍都適宜。
5培養(yǎng)細(xì)胞出現(xiàn)死亡其可能的原因有什么？解決辦法有哪些？
答：可能的原因有培養(yǎng)箱內(nèi)無(wú)CO2；培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大；細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過(guò)程中損傷；培養(yǎng)液滲透壓不正確；培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積等。
解決辦法可以檢測(cè)培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度，檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；取新的保存細(xì)胞種；檢測(cè)培養(yǎng)液滲透壓等；換入新鮮培養(yǎng)液等。
6如何消除組織培養(yǎng)的污染？
答：當(dāng)重要的培養(yǎng)細(xì)胞污染時(shí)，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)，檢查HEPA過(guò)濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂(lè)菌素時(shí)尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟。
1)在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。
2)分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如，兩性霉素B推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0，8.0mg/ml。
3)每天觀測(cè)細(xì)胞毒性指標(biāo)，如脫落，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓。
4)確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2-3代。
5)在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。
6)重復(fù)步驟4。
7)在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代，確定污染是否以已被消除。