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LC-MS/MS方法 | 測定血漿中的葉酸及代謝物
閱讀：261發(fā)布時間：2025-1-16
葉酸（維生素 B9）是人體必需的一種水溶性維生素，它在胎兒正常發(fā)育、紅細胞形成、心血管健康、免疫系統(tǒng)和精神健康方面都有非常重要的作用。葉酸在人體細胞中無法合成，因此只能通過從外界攝取獲得。
同時，臨床中妊娠期女性的葉酸（維生素B9）狀態(tài)評估非常重要，能否保證葉酸的合理攝入對孕婦及胎兒的生命和健康有著至關重要的影響。因此許多國家建議女性從懷孕前一個月或三個月時開始補充葉酸(維生素B9)。
從這種實際需求出發(fā)，Restek 基于 LC-MS / MS 平臺，在 HILIC-Si 色譜柱上建立了孕婦血漿中葉酸及代謝物的檢測方法，針對性地解決相關的臨床診斷問題。
分析方法
以 Raptor HILIC-Si 柱測定血漿中的葉酸及代謝物，結果如下：
Restek 色譜圖：LC_CF0698
峰 | tR(min) | 濃度 (ng/mL) | 母離子 | 子離子 |
5-甲酰 四氫葉酸 | 2.23 | 50 | 474.2 | 327.0 |
葉酸 | 2.23 | 25 | 442.2 | 295.0 |
5-甲基 四氫葉酸 | 2.25 | 25 | 460.3 | 313.0 |
色譜條件 | |
色譜柱 | Raptor HILIC-Si (貨號：9310A5E) |
規(guī)格 | 50 mm x 3.0 mm ID |
粒徑 | 2.7 µm |
柱溫 | 30 °C |
標準品 / 樣品 |
|
溶劑 | 乙腈（20 mM 乙酸銨）：水 = 80 : 20，含 10 mg / mL 2-Mercaptoethanol |
濃度 | 樣品前處理后最終濃度 6.25 ng / mL |
進樣量 | 5 µL |
流動相 |
|
A | 水 : 乙腈 = 50 : 50，20 mM 乙酸銨 |
B | 水 : 乙腈 = 20 : 80，20 mM 乙酸銨 |
時間(min) | 流速(mL/min) | %B |
0.00 | 0.5 | 100 |
3.00 | 0.5 | 0 |
3.20 | 0.5 | 0 |
3.21 | 0.5 | 100 |
5.21 | 0.5 | 100 |
最大壓力 | 344 bar |
檢測器 | MS / MS |
離子化方式 | ESI + |
掃描模式 | MRM |
儀器 | UHPLC |
樣品制備 | |
1. 取 380 μL 含有 100μg / mL 2-Mercaptoethanol的血漿（K2EDTA，2x 活性炭處理），加入 20 μL 強化溶液。
2. 渦旋 2 分鐘，以 4000 rpm 離心 2 分鐘。
3. 用 1 mL 甲醇活化 EVOLUTE EXPRESS WAX 30 mg SPE板（Biotage 604-0030-PX01），然后用 1 mL 2% 甲酸）平衡。打開真空泵，將 SPE 板全干燥。
4. 將 400 μL 樣品加載到 SPE 板上并施加真空。
5. 用 1 mL 水清洗 SPE 板,然后抽真空使之全干燥。
6. 以 300 μL 含 5% 氨水的甲醇（含 10 mg / mL 的 2-Mercaptoethanol）作為洗脫溶劑。啟動真空泵進行洗脫。
7. 將提取物在 30°C 下氮氣吹干。
8. 用 200 μL 流動相 B（含 10 mg / mL 2-Mercaptoethanol）復溶，進行上機測試。
* 注：整個樣品制備過程是在昏暗的燈光下進行的。 | |
解決方案
除此之外，Restek 還可提供同時分析多種水溶性維生素解決方案：
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