Corning® NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)套裝

NK細(xì)胞是當(dāng)今免疫-治療常用的細(xì)胞。但是NK細(xì)胞培養(yǎng)操作難度大，對(duì)培養(yǎng)條件、培養(yǎng)技術(shù)要求很高，難以獲得高純度高效能的活性細(xì)胞。 Corning NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝由多個(gè)組分組成，為 NK細(xì)胞培養(yǎng)提供簡(jiǎn)便的操作方案。使用該套裝所獲得細(xì)胞數(shù)量產(chǎn)量高，活性高，具有很高的殺傷效應(yīng)。

Corning® NK細(xì)胞活化/擴(kuò)增培養(yǎng)套裝

英文名：Corning® NK Expansion Kit

中文名：Corning® NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)套裝

應(yīng)用：NK細(xì)胞活化擴(kuò)增

品牌產(chǎn)地：美國(guó)Corning

保存：2°C - 8°C

貨號(hào)：88-570-kit

產(chǎn)品組成

NK細(xì)胞活化培養(yǎng)基

NK細(xì)胞活化添加劑

NK細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基

抗體預(yù)包被T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶

細(xì)胞培養(yǎng)袋

產(chǎn)品特色

擴(kuò)增能力強(qiáng)，在14天內(nèi)可達(dá)到100倍擴(kuò)增

效應(yīng)細(xì)胞比例高，可達(dá)80％

操作方便

產(chǎn)品訂購信息

華雅再生醫(yī)學(xué)旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司授權(quán)代理Corning免疫細(xì)胞治療產(chǎn)品。紅榮微再以“傳遞科學(xué)價(jià)值，服務(wù)科學(xué)研究"為宗旨，主營(yíng)干細(xì)胞、精準(zhǔn)醫(yī)療、細(xì)胞治療、器官再生四大板塊的產(chǎn)品。

：  ：150、210、10459。紅榮微再-客服:  經(jīng)銷商專員

Corning® NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)套裝

Corning® NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)套裝性能

圖1. NK細(xì)胞在Corning培養(yǎng)基中能夠得到更有效的擴(kuò)增

圖2. Corning培養(yǎng)基中獲得的NK細(xì)胞具有更高的細(xì)胞毒性

健康人的PBMC細(xì)胞接種數(shù)量為3x10⁷ ，根據(jù)廠家建議進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。使用Corning培養(yǎng)基時(shí)，0-5天使用NK活化培養(yǎng)基 (Primary Medium)，6-14天使用NK 擴(kuò)增培養(yǎng)基 (NK Expansion Medium )添加1000 IU/mL IL-2 進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)至14天收獲，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和腫瘤殺傷能力檢測(cè)。腫瘤殺傷實(shí)驗(yàn)

使用的靶細(xì)胞為K562細(xì)胞。

圖３. Corning培養(yǎng)基中獲得的NK細(xì)胞具有更高的CD3-CD56+陽性率 (83.0% vs 67.6%)。

健康人的PBMC細(xì)胞根據(jù)廠家建議進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)至14天收獲，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和檢測(cè)。細(xì)胞使用CD3 FITC /CD56 PE進(jìn)行染色，之后使用BD AccuriTM C6 flow cytometer進(jìn)行檢測(cè)。

Corning® NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)套裝使用方法

NK 細(xì)胞擴(kuò)增和活化

1. 抗凝血室溫離心，400 xg，10min，上層血漿轉(zhuǎn)移到新管。

2. 熱滅活自體血漿，56°C，30min。離心， 800 xg ， 20 min，去除沉淀。4°C 保存上清血漿，培養(yǎng)備用。

3. 加入等體積PBS（不含鈣鎂）替代被移除血漿保持體積不變，小心重懸血細(xì)胞。

注意：PBS預(yù)加0.1%人血清白蛋白（HSA）利于保持血細(xì)胞活性。

4. 使用淋巴細(xì)胞分離液從上面的血樣中制備PBMCs（人外周血單個(gè)核細(xì)胞）。

注意：使用新鮮采集的人血（2h內(nèi)采集）有利培養(yǎng)，不要使用超過24h的血樣。

5.  至少5倍體積的PBS（不含鈣鎂）清洗PBMCs。室溫離心500xg，10min，收集PBMCs。

6.  PBMCs稀釋到 1 x 10⁶ cells/mL，使用NK活化培養(yǎng)基配比1.8mL NK活化添加劑和10%自體血漿。

7.  預(yù)包被T-75培養(yǎng)瓶使用前，用PBS（不含鈣鎂）清洗兩次。

8.  添加30 mL PBMC懸液到預(yù)包被T-75培養(yǎng)瓶，37°C，5% CO2培養(yǎng)。

注意：第六天之前，如果培養(yǎng)基變黃，細(xì)胞密度超過2.0 x 10⁶ cells/mL，需要添加新鮮的NK活化培養(yǎng)基配比10%自體血漿，保持細(xì)胞密度大于 5 x 10⁵ cells/mL。

9.  培養(yǎng)第六天，培養(yǎng)液離心，適量NK擴(kuò)增培養(yǎng)基（1000 IU/mL IL-2 和10%自體血漿）重懸細(xì)胞，再轉(zhuǎn)移到T-225培養(yǎng)瓶或透氣細(xì)胞培養(yǎng)袋。

10.  每隔兩三天，根據(jù)細(xì)胞擴(kuò)增狀態(tài)，培養(yǎng)體系中添加新鮮的NK擴(kuò)增培養(yǎng)基（1000 IU/mL IL-2 和10%自體血漿）保持細(xì)胞密度在5 x 10⁵到 2.0 x 10⁶ cells/mL之間。

注意：NK擴(kuò)增階段，所加新鮮培養(yǎng)基自體血漿含量推薦范圍：0.5%-1%。

11.  培養(yǎng)14天左右，收獲NK細(xì)胞。

注意：整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，細(xì)胞懸液吹打和培養(yǎng)容器拍打都要輕柔，以避免細(xì)胞損傷，保持細(xì)胞活性。

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