產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 保存 | 價格(元) |
2 x Taq PCR Master Mix | D1101L1146 | 1 mL | -20℃ | 200 |
產(chǎn)品簡介
2 × Taq PCR Master Mix是即用型的常規(guī)PCR預(yù)混合溶液，含有Taq DNA Polymerase、dNTP混合物、MgCl2以及優(yōu)化的緩沖體系，它以2×的濃度形式存在，反應(yīng)時只需加入所需引物和模板，用水稀釋即可立刻配制完P(guān)CR體系。本產(chǎn)品中含有PCR產(chǎn)物具有3’-dA突出端，可輕松克隆至T載體。
運輸與保存方法
冰袋運輸。收到產(chǎn)品后放到-20 ºC保存，有效期12月以上。
使用方法
1. 反應(yīng)體系配制（50μl）：
模板DNA | optional |
引物1（10 μM） | 2 μL |
引物2（10 μM） | 2 μL |
2× PCR Master Mix (With Dye) | 25μL |
ddH2O | up to 50μL |
注：針對不同模板的*反應(yīng)濃度有所不同，下表為50μl反應(yīng)體系推薦模板使用量，僅供參考。
人基因組DNA | 0.1～1 μg |
大腸桿菌基因組DNA | 10～100 ng |
λDNA | 0.5～5 ng |
質(zhì)粒DNA | 0.1～10 ng |
2. PCR循環(huán)反應(yīng)條件
94℃ | 5 min（預(yù)變性） | |
94℃ | 30 sec | 35個循環(huán) |
55℃* | 30 sec | |
72℃ | 30 sec | |
72℃ | 7 min（*延伸） | |
注：退火溫度需要根據(jù)引物的Tm值調(diào)整，一般設(shè)置成低于引物Tm值1-2℃即可。
注意事項
1.由于Taq DNA Polymerase室溫下也有一定的反應(yīng)活性，PCR反應(yīng)體系配制需在冰上進行。體系混勻后快速置于PCR儀進行反應(yīng)。這樣可以減少反應(yīng)準(zhǔn)備階段的非特異擴增，有助于得到更好的PCR結(jié)果。
2. 引物設(shè)計注意事項
2.1 引物3’端zui后一個堿基選擇C或G，端zui后8個堿基應(yīng)避免出現(xiàn)連續(xù)錯配；端盡量避免發(fā)卡結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)；
2.2 引物Tm值控制在55℃-65℃之間；
2.3 引物額外附加序列，即與模板非配對序列，不應(yīng)參與引物Tm值計算；
2.4 引物GC含量控制在40%-60%之間；
2.5 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量盡可能一致。
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