產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 保存 | 價格(元) |
HotStart Taq DNA聚合酶 | D1010L1181 | 50μL | -20 ℃ | 395 |
產品描述
本制品是Taq經特殊工藝處理后的制品，經處理后的Taq酶在加熱至高溫前，其聚合酶活性被抑制，從而抑制低溫條件下由引物的非特異性退火或引物二聚體引起的非特異性擴增。本制品適用于高特異性PCR反應、Multiplex PCR、高GC含量（>60%），有二級結構等有較強背景的基因組擴增和大規(guī)模基因組擴增檢測。
本產品經多次柱純化，SDS-PAGE檢測僅見清晰單一條帶，PCR檢測無大腸桿菌DNA殘留，未發(fā)現(xiàn)核酸內、外切酶活性。
活性定義
熱激活后，在74℃條件下，30分鐘內催化10nmol dNTPs的摻入反應為酸不溶性物質所需的酶量為一個單位(1U)。
產品特點
簡便：無需改變常規(guī)熱啟動酶PCR程序，可在所有正常PCR程序中實現(xiàn)熱啟動PCR的效果。
：有效減少了雜帶及拖帶產生，從而實現(xiàn)高特異性的PCR。
靈敏：可從0.05ng人基因組DNA模板中擴增出特定基因片段。
產品用途
高特異性PCR反應；復雜模板擴增；Multiplex PCR；基因組擴增檢測；
使用建議
使用本試劑擴增得到的PCR產物3´ 端有一突出"A"堿基，可直接克隆于T-vector中。Mg2+濃度過高會產生非特異性條帶，但是如果做SYBRGreen熒光定量時，需增加0.5-2mM Mg2+
產品組份
組分 | D1010L1181 | D1010L1182 |
Hot Start Taq(5U/μL) | 50 μL | 5 x 50 μL |
dNTPs混合液(各10mM) | 200 μL | 1 mL |
5× HS Taq Buffer with Mg2+ | 2 x 1 mL | 10 x 1 mL |
運輸和儲存
-20℃運輸和保存，避免反復凍融，在保存條件下可保存1年。
使用方法
常用反應體系 | 常用PCR程序 | |||
5 x HS Taq Buffer with Mg2+ 上游引物 下游引物 dNTPs(個10mM) 模板
HotStart Taq DNA聚合酶 ddH2O | 10μL 0.2-1.0μM(終濃度) 0.2-1.0μM(終濃度) 1μL 1-50ng 10ng-1μg 0.25μL(1.25U) 至50μL | 擴增片段<3k 94℃ 5分鐘 94℃ 5s 30次循環(huán) 57℃ 20s 72℃ 60s/kb 72℃ 5分鐘 4℃ 保溫 | 擴增片段≥3k 94℃ 30次循環(huán) 72℃ 4℃ |
5分鐘 94℃ 5s 68℃ 60s/kb 5分鐘 保溫 |
注意事項
1. 體系中加入的推薦的酶量，可用于大多數PCR擴增，對于某些PCR，若想得到的擴增效果，可以適當添加酶量。
2. 體系中Mg2+量（2mM）可滿足大部分PCR擴增，對于特殊PCR反應，可根據需要調整為2-4mM。
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