PVDF膜（聚偏氟乙烯膜）在Western Blot實(shí)驗(yàn)中廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印，但其本質(zhì)是一種具有疏水性的聚合物，需要在使用前進(jìn)行預(yù)處理活化，使其在水性緩沖液中更易使用。PVDF膜具有不同的孔徑大小，這些不同之處會(huì)影響其在過濾和分離應(yīng)用中的性能和適用性。
PVDF孔徑大小不同
• 0.22μm的PVDF膜適用于截留較小的分子，如小于20kD的蛋白質(zhì)分子。這種膜的孔徑較小，能夠有效地過濾掉較小的顆粒物和細(xì)菌。
• 0.45μm的PVDF膜則適用于較大分子的蛋白和核酸，以及大于20kD的蛋白質(zhì)。這種膜的孔徑較大，更適合于需要保留較大顆粒的場(chǎng)合。
PVDF操作壓力與通量不同
• 0.22μm的膜孔徑較小，通常需要更高的操作壓力來(lái)維持相同的通量，這可能導(dǎo)致較高的操作阻力。
• 0.45μm的膜孔徑較大，允許更大的通量，通常需要較低的操作壓力，因此具有較低的操作阻力。
PVDF蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移與分辨率不同
• 0.22μm的膜因其較小的孔徑和較高的結(jié)合能力，特別適用于分子量小于20kDa的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移。擁有更高轉(zhuǎn)移的分辨率，適用于檢測(cè)蛋白質(zhì)大小相近的多個(gè)條帶或進(jìn)行精細(xì)的蛋白質(zhì)定量分析。
• 0.45μm的膜則更適合分子量大于20kDa的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移。較大的孔徑減少了膜上的堵塞，分辨率相對(duì)較低，但在轉(zhuǎn)移大分子量蛋白質(zhì)時(shí)可能更為有效。
PVDF應(yīng)用范圍不同
• 0.22μm PVDF膜適用于高度微生物阻隔的應(yīng)用，如醫(yī)療行業(yè)、生物制藥、實(shí)驗(yàn)室和飲用水處理等。
• 0.45μm PVDF膜適用于顆粒去除、預(yù)過濾和一些微生物過濾應(yīng)用，如食品和飲料加工、廢水處理以及實(shí)驗(yàn)室預(yù)過濾等。
PVDF膜使用注意事項(xiàng)
? 甲醇激活
使用前用甲醇浸泡。甲醇能夠使PVDF膜的表面活化，增加膜的疏水性，從而提高其對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)合能力。
? 避免干燥
激活膜后、轉(zhuǎn)膜過程中以及轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，都要快速在液體間轉(zhuǎn)移膜，避免膜在空氣中干燥，影響后續(xù)曝光。
? 避免直接接觸
應(yīng)避免直接用手接觸膜表面，以防止油脂和蛋白質(zhì)污染，影響轉(zhuǎn)膜效率并產(chǎn)生背景污斑。全程應(yīng)使用鑷子操作膜，以減少污染和物理?yè)p傷。
? 排盡氣泡
在進(jìn)行電轉(zhuǎn)印時(shí)，需要確保凝膠和PVDF膜之間沒有氣泡，因?yàn)闅馀輹?huì)影響蛋白質(zhì)的均勻轉(zhuǎn)移。
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