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            南京信帆生物技術(shù)有限公司
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            谷氨酸(Glu)含量測定試劑盒說明書

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            測定原理:
            利用提取液提取,然后用顯色劑進行顯色,顯色后在570nm 下進行測定。

            需自備的儀器和用品:
            可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、
            蒸餾水。

            試劑的組成和配制:
            試劑一:液體120mL×1 瓶,4℃保存;
            試劑二:粉劑×1 瓶, 4℃保存;臨用前加入5mL 蒸餾水充分溶解混勻,用不完的試劑仍 4℃
            保存。

            谷氨酸提?。?br />1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞樣品:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞
            數(shù)量(104 個):試劑一體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL
            試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30
            次);8000g 常溫離心10min,取上清,置冰上待測。
            2、組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g 組
            織,加入1mL 試劑一),進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min,取上清,置冰上待測。
            3、血清(漿)或細(xì)胞培養(yǎng)液樣品:按照血清(漿)或細(xì)胞培養(yǎng)液體積(mL):試劑一體積
            (mL)為1:5~10 的比例(建議取0.1mL 血清(漿)或者細(xì)胞培養(yǎng)液加入1mL 試劑一),進
            行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min,取上清,置冰上待測。

            測定步驟
            1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長至570nm,蒸餾水調(diào)零。
            2、 在有蓋EP 管中加入下列試劑:
            試劑名稱(μL) 測定管 對照管
            樣本 250
            試劑一 250
            試劑二 50 50
            混勻,90℃水浴20min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻,取200uL 至微量石英比色皿
            或96 孔板中,于570nm 波長處記錄吸光值A(chǔ)。△A=A 測定管-A 對照管。對照管只要做一
            管。

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