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            南京信帆生物技術(shù)有限公司
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            溶菌酶檢測試盒說明書

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            一、測定原理:
            在一定濃度的混濁菌液中,由于溶菌酶能水解細(xì)菌細(xì)胞壁上肽聚糖使細(xì)菌裂解而濃度降低,透光度增強(qiáng),故可以根據(jù)透光度變化來推測溶菌酶的含量。

            二、試劑組成及配制 (30T/28樣)
            1、試劑組成:
            試劑一:菌粉,5mg×4支,2~8℃干燥保存,有效期6個月。
            試劑二:菌粉溶劑,100ml×1瓶,2~8℃保存,并每月放微波爐中溫消毒20秒,有效期6個月。
            試劑三:標(biāo)準(zhǔn)品,粉劑2mg×1支(活力為8萬單位/mg),2~8℃干燥保存,有效期6個月。
            [注]:試劑盒嚴(yán)格按照上述方法保存有效期可延至一年。
            2、試劑配制:
            (1)、貯備菌液的配制:
            取5mg/支的菌粉1支,倒入勻漿管中,加菌粉溶劑1ml,輕輕緩慢上下旋轉(zhuǎn)研磨3分鐘(切勿濺出),即為貯備菌液,將其取出后置2~8℃冰箱密封保存一周左右。
            (2)、應(yīng)用菌液的配制:
            按貯備菌液:菌粉溶劑=1:19進(jìn)行配制,需多少配多少。剩下的應(yīng)用菌液2~8℃可保存一周左右。是現(xiàn)用現(xiàn)配,用時搖勻。
            (3)、標(biāo)準(zhǔn)品的配制:
            ①、標(biāo)準(zhǔn)品貯備液的配制:
            每支準(zhǔn)確加雙蒸水1.0ml配成2mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。2~8℃可保存7~10天。
            ②、標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液的配制:
            臨用時按標(biāo)準(zhǔn)品貯備液∶雙蒸水=1∶799比例稀釋成2.5μg/ml(即200U/ml)的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液,需多少配多少。2~8℃保存,可保存7~10天。
            附錄Ⅰ:自身對照法測定溶菌酶
            (適用于樣本數(shù)量較少,或者樣本有混濁或有顏色,如血液紅色)
            [注]:本法用分光光度計530nm處,1cm光徑比色皿測得是樣本或標(biāo)準(zhǔn)的透光度值

            1、操作步驟
            ①、將配制好的應(yīng)用菌液,標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液及所需檢測的樣本均放入37℃水浴箱中預(yù)溫5分鐘
            以上。使菌液,標(biāo)準(zhǔn)液及檢測樣本的溫度達(dá)到37℃。
            ②、將可見分光光度計于530nm處,1cm光徑比色皿,以雙蒸水調(diào)透光度100% (比色皿準(zhǔn)備兩只,一只用于調(diào)透光度100%,一只用于測定)。
            ③、往相應(yīng)編號的試管中加入0.2ml待測樣本,取2ml應(yīng)用菌液迅速沖入試管中,立即混勻并計時。(標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液取0.2ml雙蒸水,加入2ml應(yīng)用菌液,其它操作與測定相同)
            ④、迅速倒入比色皿中在可見分光光度計530nm處比濁,5秒時讀取透光度值T0, 比色皿不要取出,在2 分5秒時讀取透光度值T2;
            [注]:如5秒時來不及讀數(shù),可20秒時讀取調(diào)透光度值T0,在2 分20秒時讀取透光度值T2,標(biāo)準(zhǔn)管需同樣操作。
            ⑤、求出2次透光度的差值(△T= T2-T0)。
            [注]:用同一比色皿每檢測一個樣本后均要用雙蒸水沖洗干凈,才可再放第二個樣本或標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液。

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