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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作分析
腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)原理:
是將機(jī)體內(nèi)的某組織取出,分散成單細(xì)胞,在人工條件下培養(yǎng)使其生存并不斷生長、繁殖的方法。借助這種方法可以觀察細(xì)胞的分裂繁殖、細(xì)胞的接觸抑制、以及細(xì)胞的衰老,死亡等生命現(xiàn)象。
腫瘤細(xì)胞動物的選擇:
選擇大約一半足孕時間的胚胎,10-13天齡胚胎含有zui大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞,成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得。
每組小鼠胚胎1個
實(shí)驗(yàn)材料:
每組的超凈臺中有以下物品:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個;
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
4、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
5、細(xì)胞計數(shù)板1塊;
6、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
7、酒精燈1臺;
腫瘤細(xì)胞試驗(yàn)操作步驟:
1)胚胎的分離。適用哺乳動物(倉鼠、小鼠和大鼠)
a.采用認(rèn)可的方案處死嚙齒動物。
b.立即在無菌超凈臺內(nèi)用70%乙醇擦洗整個動物。
c.用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口,用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。
d.用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部,取出含有胚胎的子宮,置于無菌的培養(yǎng)皿上。
e.剔除胚胎周圍的包膜,將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。
f.漂洗胚胎,去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
2)將1-2個胚胎轉(zhuǎn)移至一個小的無菌培養(yǎng)皿中,用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎, 用PBS漂洗。
3)在無菌狀態(tài)下,將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml 的無菌離心筒中, 加入40ml 0.25%的無菌胰蛋白酶,用攪拌棒輕輕攪動 。
4)在溫暖的環(huán)境中或置于37 °C培養(yǎng)箱中輕輕搖動15分鐘。
5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降,將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無菌50ml的離心管中,該管內(nèi)按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,胰蛋白酶。
6)加人新鮮胰蛋白酶溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中,重復(fù)步驟4和5。
7)離心混合的細(xì)胞懸液,1200r/rain,5分鐘,棄上清。
8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞,按步驟7再次離心。
9)用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止。
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