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            上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第10年

            15026555973

            ATCC細(xì)胞
            蛋白質(zhì)產(chǎn)品
            核酸擴(kuò)增產(chǎn)品
            elisa試劑盒
            生化試劑
            PCR試劑盒
            標(biāo)準(zhǔn)品
            PCR鑒定
            生化試劑盒
            科研細(xì)胞
            分子生物學(xué)試劑
            ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)
            蛋白
            抗體

            ATCC細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)的問(wèn)題和解決方法

            時(shí)間:2017/5/25閱讀:658
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            一、培養(yǎng)ATCC細(xì)胞不貼壁

            可能原因: 
            胰蛋白酶消化過(guò)度 
            支原體污染 
            培養(yǎng)基pH值過(guò)堿(NaHCO3分解)               
            細(xì)胞老化 
            接種細(xì)胞起始濃度太低或太高 
            解決方法: 
            縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度 
            分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。 
            使用無(wú)菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2 
            啟用新的保種細(xì)胞 
            調(diào)節(jié)*接種細(xì)胞濃度

            二、懸浮細(xì)胞成簇

            可能原因: 
            培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子; 
            支原體污染; 
            蛋白酶過(guò)度消化使得細(xì)胞裂解; 
            DNA污染 
            解決方法: 
            用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞,輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液; 
            分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體; 
            用DNaseI處理細(xì)胞

            三、培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢

            可能原因:
            由于更換不同培養(yǎng)液或血清; 
            培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子耗盡或缺乏或已被破壞; 
            培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染; 
            試劑保存不當(dāng); 
            接種ATCC細(xì)胞起始濃度太低; 
            細(xì)胞已老化; 
            支原體污染 
            解決方法: 
            比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn),讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液; 
            換入新鮮配置培養(yǎng)液,或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長(zhǎng)因子;
            用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,丟棄培養(yǎng)物;
            血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存,需在1周內(nèi)用完;
            增加接種細(xì)胞起始濃度; 
            換用新的保種細(xì)胞; 
            分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。

            四、培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)不好

            可能原因:
            細(xì)胞本身的狀態(tài)
            細(xì)胞傳代次數(shù)多,細(xì)胞老化;
            細(xì)胞的接種量:接種量過(guò)低,細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢;
            細(xì)胞傳代時(shí)間過(guò)晚:細(xì)胞中毒,影響傳代后的細(xì)胞生長(zhǎng);
            胰酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短:時(shí)間過(guò)長(zhǎng),細(xì)胞死亡;時(shí)間過(guò)短,細(xì)胞未*分離而成團(tuán),細(xì)胞死亡;
            細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇:慢凍速融。
            污染
            支原體污染
            霉菌污染
            培養(yǎng)基或血清
            更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗(yàn)證
            選擇的培養(yǎng)基是否合適
            培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無(wú)誤
            培養(yǎng)環(huán)境
            CO2供應(yīng)是否正常
            ATCC細(xì)胞培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確

             

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