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            上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第10年

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            ATCC細(xì)胞
            蛋白質(zhì)產(chǎn)品
            核酸擴(kuò)增產(chǎn)品
            elisa試劑盒
            生化試劑
            PCR試劑盒
            標(biāo)準(zhǔn)品
            PCR鑒定
            生化試劑盒
            科研細(xì)胞
            分子生物學(xué)試劑
            ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)
            蛋白
            抗體

            腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)操作注意事項(xiàng)

            時(shí)間:2017/6/8閱讀:1127
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            1. 腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,以70 %ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面,并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后,才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái),以70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘以上后,再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。
             
            2. 無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置,其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出,以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以 70 % ethanol 擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無(wú)菌區(qū)域,勿在邊緣之非無(wú)菌區(qū)域操作。
             3. 小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開(kāi)后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45° 角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
             4. 工作人員應(yīng)注意自身之安全,須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來(lái)自人類(lèi)或是病毒感染之腫瘤細(xì)胞應(yīng)特別小心操作,并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無(wú)菌操作臺(tái)(至少 Class II)。操作過(guò)程中,應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生,并避免尖銳針頭之傷害等。
             5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目: 5.1. CO2 鋼瓶之CO2壓力 5.2. CO2 培養(yǎng)箱之CO2濃度、溫度、及水盤(pán)是否有污染(水盤(pán)的水用無(wú)菌水,每周更換)。 5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力,定期更換紫外線燈管及HEPA 過(guò)濾膜,預(yù)濾網(wǎng)(300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng),3000 小時(shí)/HEPA)。
             6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),定期更換水槽的水
             7. 認(rèn)真按照操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn),一般不大會(huì)導(dǎo)致污染,很多情況下是由于所用的試劑或培養(yǎng)基有污染而使實(shí)驗(yàn)失敗,粉末培養(yǎng)基配制好后(加了血清),一般在4度盡量不要超過(guò)1個(gè)月,如在-20度存放時(shí)間可長(zhǎng)一些,但也不要超過(guò)3-4個(gè)月,可能對(duì)于永生化細(xì)胞株來(lái)說(shuō)要求不是太高,但我在過(guò)去的4年里一直是作原代 細(xì)胞培養(yǎng) 的,細(xì)胞嬌弱,經(jīng)驗(yàn)表明放置時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。
             8. 許多塑料制品也可以高壓消毒,例如培養(yǎng)瓶蓋,膠塞,吸頭等。不能用于高壓的一般均已制成一次性作用的商品了,當(dāng)然如果 money有限,如進(jìn)口的培養(yǎng)板、皿等,也可以重復(fù)使用1-2次,我當(dāng)時(shí)使用方法是將其*清潔后,使用前在紫外燈下敞開(kāi)照射1-1.5h即可,我做過(guò)多次,沒(méi)有出現(xiàn)問(wèn)題。腫瘤細(xì)胞塑料培養(yǎng)瓶由于清洗消毒不便,不要重復(fù)使用,如一定要重復(fù)用,可用環(huán)氧乙烷等消毒,(消毒后一定要放置半年以上方可使用)
             

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