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一、腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>
能獨(dú)立地進(jìn)行用于細(xì)胞培養(yǎng)的各種器皿的清洗與消毒,掌握干熱滅菌法、濕熱滅菌法和濾過(guò)除菌法的操作,了解化學(xué)消毒法的使用方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
清洗與消毒是組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的*步,是組織培養(yǎng)中工作量zui大,也是zui基本的步驟。體外培養(yǎng)細(xì)胞所使用的各種玻璃或塑料器皿對(duì)清潔和無(wú)菌的要求程度很高。細(xì)胞養(yǎng)不好與清洗不*有很大關(guān)系。清洗后的玻璃器皿,不僅要求干凈透明,無(wú)油跡,而且不能殘留任何物質(zhì)。如有毒的化學(xué)物質(zhì),哪怕殘留0.1個(gè),也可能影響細(xì)胞生長(zhǎng)。滅菌手段的選擇十分重要,對(duì)不同的物品需采用不同的滅菌方法。假如選用的方法不對(duì),即使達(dá)到了無(wú)菌卻使被滅菌藥品喪失了營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、生物學(xué)特性或其他使用價(jià)值也不行。以下在每種滅菌步驟中都介紹其使用范圍。
三、實(shí)驗(yàn)材料、用品
1、材料:無(wú)臭氧型紫外燈,微孔濾膜(直徑25):孔徑為0.22μm,微孔濾膜(直徑90):孔徑為0.22 μm,過(guò)濾器(直徑25)。
2、藥品:70%或75%酒精,0.1%新潔爾滅,煤酚皂溶液(來(lái)蘇兒水),0.5%過(guò)氧乙酸,乳酸,37%甲醛,高錳酸鉀,NaOH,鹽酸,重鉻酸鉀,濃硫酸(工業(yè)),DEPC水[體積分?jǐn)?shù)0.1%的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。
3、儀器:超凈臺(tái),干燥箱,高壓鍋,過(guò)濾器,過(guò)濾泵。
四、實(shí)驗(yàn)步驟
(一)實(shí)驗(yàn)器具清洗
l 玻璃類 1、主要有:培養(yǎng)瓶,血清瓶,小青瓶,移液管,離心管,試管,培養(yǎng)皿等。
2、清洗步驟:
泡在含有洗潔凈的自來(lái)水中→撈出來(lái)用毛刷將實(shí)驗(yàn)器具各個(gè)面刷洗至少25遍→自來(lái)水沖洗25遍→過(guò)一遍一蒸水→泡入鉻酸,過(guò)夜(24h左右)→從鉻酸中撈出器具,自來(lái)水沖洗25遍→過(guò)三遍一蒸水,三遍三蒸水→烘箱內(nèi)烘干→收入柜子備用→用前高溫滅菌(121℃,25min)→烘干→使用。
注意:新的玻璃器具先要泡鹽酸1天,然后清洗步驟與上面相同。
l 塑料類
1 塑料類器具主要包括:孔板,大槍頭,瓶蓋,濾器,采血管等。
2 清洗步驟:
(1)孔板,采血管
泡在有洗潔凈的自來(lái)水中→用超聲清洗儀超聲3遍(每遍1小時(shí),200C)→在含有洗潔凈的自來(lái)水中用毛刷或者紗布將各個(gè)面刷洗至少25遍→過(guò)一遍一蒸水→泡入鹽酸過(guò)一個(gè)禮拜→從鹽酸中撈出后自來(lái)水沖洗25遍→過(guò)三遍一蒸水(每遍3次),三遍三蒸水→烘箱內(nèi)烘干→收入柜子→用前包裝好照鈷→使用
(2)大槍頭,蓋子,濾器
腫瘤細(xì)胞在含有洗潔凈的自來(lái)水中用毛刷或者紗布將各個(gè)面刷洗至少25遍→用超聲清洗儀超聲1遍(每遍45分鐘,200C)→自來(lái)水沖洗→過(guò)三遍一蒸水(每遍3次),三遍三蒸水→烘箱內(nèi)烘干→收入柜子→用前包裝好滅菌→使用
注意:(1)烘孔板時(shí)溫度不應(yīng)太高,烘干后用報(bào)紙包裹,裝入箱子內(nèi),照鈷,便可使用。
(2) 新的培養(yǎng)瓶蓋子泡舊5%稀鹽酸1天→再用2%NaOH煮20min →自來(lái)水沖洗→洗潔精清洗→用超聲清洗儀超聲1遍(每遍45分鐘,200C)→沖洗15遍→過(guò)三遍一蒸(每遍3次)→過(guò)三遍三蒸水→烘干使用
1,2,4,5-環(huán)己烷四甲酸二酐(>98.0%(T)) 英文名稱: 1,2,4,5-Cyclohexanetetracarboxylic Dianhydride 質(zhì)量規(guī)格: >98.0%(T) CAS號(hào): 2754-41-8
1,2,4,5-四甲基苯(NMR定量標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%(GC)) 英文名稱: 1,2,4,5-Tetramethylbenzene 質(zhì)量規(guī)格: NMR定量標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%(GC) CAS號(hào): 95-93-2
1,2,4,5-四氯苯(標(biāo)準(zhǔn)品) 英文名稱: 1,2,4,5-Tetrachlorobenzene 質(zhì)量規(guī)格: 分析標(biāo)準(zhǔn)品 CAS號(hào): 95-94-3
1,2,4,5-四氯苯標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.104mg/ml,基體:異辛烷) 英文名稱: 1,2,4,5-Tetrachlorobenzene solution 質(zhì)量規(guī)格: 0.104mg/ml,基體:異辛烷 CAS號(hào): 95-94-3
腫瘤細(xì)胞
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