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            上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
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            ATCC細(xì)胞
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            ATCC細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則

            時間:2018/7/3閱讀:915
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            ATCC細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實(shí)驗證明這樣可以zui大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。
                細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實(shí)驗順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中,及時凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,雜交瘤細(xì)胞、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是*的實(shí)驗操作。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時候,細(xì)胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等導(dǎo)致實(shí)驗失敗,如果沒有原始細(xì)胞的凍存,則因為上述的意外而前功盡棄。
            1、常用凍存液組成成分
            20%血清(FBS)、10%DMSO、70%1640培養(yǎng)液;或90%血清(FBS)、10%DMSO,更可防止細(xì)胞內(nèi)冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中,各自含量占總體積的10%,然后濾膜過濾后分裝保存?zhèn)溆谩?br />2、DMSO在凍存液中的作用
            DMSO在4℃時對細(xì)胞無明顯毒性,分子量小、溶解度大、易透過細(xì)胞膜,降低細(xì)胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度,使ATCC細(xì)胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細(xì)胞內(nèi)水分也不會過分外滲,避免了細(xì)胞過分脫水皺縮;DMSO與水分子結(jié)合,可使冰點(diǎn)下降,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少冰晶損傷。
            3、注意事項     
              1.DMSO 不用高壓滅菌;DMEM不能高溫高壓滅菌,可以過濾除菌。
              2.DMSO要用新的,而且要避光保存。
              3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。

             新型血管活性因子UCN(小鼠、大鼠)IgG 大鼠過敏毒素/補(bǔ)體片斷4a(C4a)

             新型抑癌基因/一種新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因IgG 大鼠過敏毒素/補(bǔ)體片斷4a(C4a)

             新型抑癌基因IgG 大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9) 

             新型抑癌基因IgG 大鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)

             信號調(diào)節(jié)蛋白αIgG 大鼠骨粘連蛋白(ON)

             信號通路WNT10AIgG 大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)

             信號通路WNT10BIgG 大鼠骨形成蛋白(BMPs)

             信號通路Wnt1IgG 大鼠骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)

             信號通路Wnt2BIgG 大鼠骨橋素(OPN)

             信號通路Wnt3aIgG 大鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)

             信號通路WntIgG 大鼠骨堿性磷酸酶(BALP)
            ATCC細(xì)胞

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