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            金龜子綠僵菌小孢變種注意事項

            時間:2021/7/12閱讀:373
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             金龜子綠僵菌小孢變種注意事項:

            1.  取細胞的過程中注意帶好防凍手套,護目鏡。此項尤為重要,細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導致爆炸。
            2.  凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO)對細胞不是*無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細胞的毒副作 較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液*融化。如果復蘇溫度太慢,會造成細胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產(chǎn)品。
            3.  離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細胞的損傷。
            4.  離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng),第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除 DMSO,去除死細胞,這個是標準流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大, 死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液 體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇,結果無有異常。
            5.  細胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15m培養(yǎng)液,而在我的試驗中的經(jīng)驗總結為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。
            6.  復蘇細胞分裝的問題:試驗中我的經(jīng)驗總結為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細胞濃度過低,不利于細胞的貼壁。
            7.  加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響 細胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是 10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。

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