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            上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第10年

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            ATCC細(xì)胞
            蛋白質(zhì)產(chǎn)品
            核酸擴(kuò)增產(chǎn)品
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            磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)樣本的前處理

            時(shí)間:2021/8/26閱讀:372
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            磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)樣本的前處理:

            組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

            1、 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬(wàn)細(xì)胞,加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三,用冰浴勻漿器

            或研缽勻漿。

            2、 將勻漿 600g,4℃離心 5min。

            3、 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心 10min。

            4、 上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的 α-KGDH(此步可選做)。

            5、 在步驟④的沉淀中加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率 20%或

            200W,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復(fù) 30 次),用于線粒體 α-KGDH 活性測(cè)定。

            測(cè)定步驟

            1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm,蒸餾水調(diào)零。

            2、 樣本測(cè)定

            (1)在試劑五中加入 18mL 試劑四充分溶解,置于 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)

            水浴 10min;現(xiàn)配現(xiàn)用;

            (2)在試劑六中加入 1mL 蒸餾水,充分溶解待用;現(xiàn)配現(xiàn)用;

            (3)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本、10μL 試劑六和 180μL 試劑五,混

            勻,立即記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2,計(jì)算 ΔA=A2-A1。

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            大鼠催產(chǎn)素(OT)ELISA Kit

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