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            上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第10年

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            ATCC細(xì)胞
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            幼蟲芽胞桿菌探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒反應(yīng)五要素

            時(shí)間:2022/9/27閱讀:184
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            幼蟲芽胞桿菌探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒反應(yīng)五要素:


            參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+


            引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:


            ①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。


            ②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。


            ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。


            ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。


            ⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。


            ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。


            ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。


            引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

            去整合素樣金屬蛋白酶20抗體

            去整合素樣金屬蛋白酶23抗體

            去整合素樣金屬蛋白酶28抗體

            去整合素樣金屬蛋白酶32抗體

            整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣4蛋白抗體

            膜粘連蛋白9抗體

            整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶15型抗體

            整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶2型抗體

            整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶8型抗體

            整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶9型抗體

            血管生成素樣蛋白4抗體

            整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶10型抗體

            嘌呤嘧啶核酸內(nèi)切酶2抗體

            神經(jīng)絲蛋白抗體

            β淀粉樣肽(1-28)抗體

            有絲分裂激酶B抗體

            軟骨蛋白聚糖抗體

            去整合素樣金屬蛋白酶10抗體

            含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族9抗體

            含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族8抗體

            植物生長(zhǎng)激素ABP1抗體

            肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白1抗體

            α紅細(xì)胞分化相關(guān)因子抗體

            血管緊張素激活蛋白1抗體

            Alpha清蛋白抗體

            AFAP1L2抗體


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