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            ATCC細胞
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            ATCC細胞轉(zhuǎn)染方案

            時間:2023/2/16閱讀:175
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            ATCC細胞建立一套適當?shù)霓D(zhuǎn)染方案;首先從一種標準方案開始,然后通過改變試劑/DNA的配比和形成復合物的數(shù)量進行優(yōu)化。

            轉(zhuǎn)染復合物的制備— 諸如轉(zhuǎn)染試劑/DNA配比,離子強度,緩沖液pH值,以及溫度等變量都會影響到轉(zhuǎn)染復合物的組成和功能。質(zhì)粒既可在無菌水又可在TE緩沖液中稀釋。如果您要使用一種市售的轉(zhuǎn)染試劑,就應當仔細閱讀該試劑所提供的使用說明。需要對試劑提供方給予一定的信賴;除非您有很好的理由支持您做出改變,否則就應當嚴格按照他們所推薦的轉(zhuǎn)染方案。在不含血清或其他蛋白的培養(yǎng)基中制備轉(zhuǎn)染復合物;如果制備復合物所使用的培養(yǎng)基含有血清,它就會對轉(zhuǎn)染產(chǎn)生抑制。

            制備轉(zhuǎn)染復合物的*孵育時間是一個非常關鍵的環(huán)節(jié),對于不同的轉(zhuǎn)染試劑而言可能差別很大。

            轉(zhuǎn)染試劑/DNA配比(負載比)—所有的轉(zhuǎn)染試劑都會在某一個試劑/DNA配比時zui為有效。有時候這種*配比的所在范圍非常狹窄;而且對于每種實驗體系都必須進行優(yōu)化才能得到*配比。為了尋找這種*配比往往會花費大量的時間和金錢。

            除了配比的重要性之外,所加入轉(zhuǎn)染復合物量的多少也非常關鍵。

            ATCC細胞形成轉(zhuǎn)染復合物所用的稀釋劑—對于多數(shù)試劑而言,很關鍵的一點是要使轉(zhuǎn)染復合物能在普通基礎培養(yǎng)基和鹽溶液中形成。

            FuGENE® HD 轉(zhuǎn)染試劑則是一個例外,因為它能在水中、不會血清的培養(yǎng)基中或含有10%血清的培養(yǎng)基中生成復合物。如果您使用的是水或含有10%血清的培養(yǎng)基,則應保證它能適用于你特定的細胞體系。

            復合物數(shù)量—對轉(zhuǎn)染細胞所用的轉(zhuǎn)染試劑/DNA復合物的量也應當進行優(yōu)化。如果用量太少,那么轉(zhuǎn)染DNA的表達就太弱;如果用量太多,則可能由于細胞毒性或其他作用反而降低蛋白的表達。*用量通常都必須進行實驗來確定。

            所需要的轉(zhuǎn)染復合物用量與所用細胞的數(shù)量相關。轉(zhuǎn)染細胞越少,所需復合物就越少。

            轉(zhuǎn)染復合物的加入—有兩種替換方法可用來漿轉(zhuǎn)染復合物加入轉(zhuǎn)染細胞:1. 將復合物濃縮液逐滴加入培養(yǎng)基,或者2. 將轉(zhuǎn)染復合物先用培養(yǎng)基稀釋,然后進行培養(yǎng)基更換操作。*種方法更簡便,而第二種方法則更因為避免了試劑在局部濃聚而產(chǎn)生毒性,所以會使結果的一致性更好。

            對于諸如FuGENE® 6 轉(zhuǎn)染試劑和HD轉(zhuǎn)染試劑這類的溫和試劑而言,您可以先將轉(zhuǎn)染復合物加入培養(yǎng)容器,然后再加入用胰蛋白酶新鮮消化得到的細胞。

            轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基— 轉(zhuǎn)染過程中所使用的培養(yǎng)基對轉(zhuǎn)染效率可能會有正面或負面的影響。甚至對于基礎培養(yǎng)基配方而言也是如此,尤其是在培養(yǎng)基中加入牛血清的情況下。胎牛血清的存在會使多種轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率降低. 某些公司還提供可與轉(zhuǎn)染試劑配合使用的優(yōu)化無血清轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基。而由羅氏應用科學部所提供的轉(zhuǎn)染試劑則無論是否存在血清都能有效轉(zhuǎn)染。

            FuGENE® H D是*的能夠轉(zhuǎn)染保存在100%血清中腫瘤細胞的轉(zhuǎn)染試劑。

            如果有抗生素(如,青霉素、鏈霉素、或兩性霉素B)存在的情況下培養(yǎng)ATCC細胞,則轉(zhuǎn)染有效性會降低至25%。因此,對于瞬時轉(zhuǎn)染,我們建議使用不加抗生素的培養(yǎng)基。

            高密度聚乙烯Polyethylene, High Density9002-88-4

            L-焦谷氨酸;L-焦性麩質(zhì)酸;L-焦性膠氨酸;L-2-吡咯烷酮-5-羧酸L-PyroglutaMic acid;L-GlutiMinic acid;GlutiMic acid;GlutaMic acid lactaM;α- AMinoglutaric acid lactaM;L-5-Oxo-2-pyrrolidine carboxylic acid;(S)-(-)-2-Pyrrolidone-5-carboxylic acid98-79-3

            L-蘇氨酸;L-異赤絲藻氨基酸L-Threonine;L-β-Hydroxy-2-aMinobutyric acid;(2S,3R)-2-AMino-3-hydroxybutyric acid;(2S,3R)-(-)-Threonine72-19-5

            L-甲狀腺素鈉;L-甲狀腺胺鈉;3,5,3′,5′-四碘甲狀腺-L-原氨L-Thyroxine sodiuMsalt;3,3′,5,5′-Tetraiodo-L-thyronine sodiuM salt pentahydrate;SodiuM levothyroxine;Levothyroxine sodiuM;Eltroxin;Thyroxevan;25416-65-3

            L-甲狀腺素;3,5,3′,5′-四碘-L-甲狀腺原氨酸;3-[4-(4-羥基-3,5-二碘苯氧基)-3,5-二碘苯基]-L-丙氨酸L-Thyroxine;3-[4-(4-Hydroxy-3,5-diiodophenoxy)-3,5-diiodophenyl]-L-alanine;β-[(3,5-Diiodo-4-hydroxyphenoxy)-3,5-diiodophenyl]-L-alanine51-49-0

            L-酪氨酸;;;L-β-對羥苯基-α-氨基丙酸;L-干酪氨基酸L-Tyrosine;(S)-2-AMino-3-(4-hydroxyphenyl)propionic acid;3-(4-Hydroxyphenyl)-L-alanine;L-α-AMino-β-p-hydroxyphenylpropionic acid;L-α-AMino- p-hydroxyhydrocinnaMic acid60-18-4

            淋巴細胞分離液LyMphocyte separation Media;

            麥康凱瓊脂;麥康克瓊脂Mac Conkey agar;

            氟化鎂MagnesiuM fluoride;Afluon;Sellaite7783-40-6

            氫氧化鎂MagnesiuM Hydroxide (AS);Marinco H1309-42-8

            硬脂酸鎂MagnesiuM Stearate (AS);DoloMol577-04-0

            七水合硫酸鎂Magnesium sulfate10034-99-8

            三硅酸鎂;三硅酸二鎂;硅酸鎂;弗羅里硅土;硅鎂型吸附劑MagnesiuM trisilicate;MagnesiuM silicate;MagnesiuM Mesotrisillicate14987-04-3

            蘋果酸Malic Acid;4455-77-0

            丙二酰胺MalonaMide;PropanediaMide;108-13-4

            丙二腈 99%Malonic acid141-82-2

            丙二腈;氰化亞甲基;二氰甲烷;氰基乙腈;縮蘋果腈Malonitrile;Methylene cyanide;DicyanoMethane;Cyanoacetonitrile109-77-3

            acid;Phenylhydroxyacetic acid;Phenylglycolic acid;α-Hydroxybenzeneacetic acid;dl-Mandelic acid90-64-2



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