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            上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第10年

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            ATP依賴性DNA連接酶Ⅰ(LIG1)重組蛋白人操作步驟

            時(shí)間:2023/3/16閱讀:237
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            ATP依賴性DNA連接酶Ⅰ(LIG1)重組蛋白人操作步驟:


            Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取


            1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。


            2.  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次,注意低溫操作;


            3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,離心10000轉(zhuǎn)/分,4℃離心5 min;


            4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);


            5. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。


            Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取


            1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;


            2. 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次;


            3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。


            4. 細(xì)胞洗滌后,轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:

            小鼠胱天蛋白酶5(CASP-5)ELISA KitMouse Caspase-5,CASP5 ELISA kit

            小鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA KitMouse Caspase 3,Casp-3 ELISA Kit

            小鼠胱天蛋白酶10(CASP-10)ELISA KitMouse Caspase-10,CASP10 ELISA kit

            小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA KitMouse Bone morphogenetic protein 6,BMP-6 ELISA Kit

            小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA KitMouse bone morphogenetic proteins,BMPs ELISA Kit

            小鼠骨涎蛋白(BSP)ELISA KitMouse Bone sialoprotein,BSP ELISA kit

            小鼠骨特性堿性磷酸酶C端肽ELISA KitMouse C-terminal peptide of bone-specific alkaline phosphatase ELISA kit

            小鼠骨特性堿性磷酸酶(BALP)ELISA KitMouse Bone-specific alkaline phosphatase,BALP ELISA kit

            小鼠骨成型蛋白9(BMP-9)ELISA KitMouse bone morphogenetic protein 9,BMP-9 ELISA Kit

            小鼠骨成型蛋白15(BMP-15)ELISA KitMouse Bone Morphogenetic Protein 15,BMP-15 Elisa kit

            小鼠谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)ELISA KitMouse glutathione peroxidase,GSH-Px ELISA Kit

            小鼠谷氨酸脫羧酶自身抗體IgM(GAD-Ab-IgM)ELISA KitMouse glutamic acid decarboxylase autoantibody IgM,GAD-Ab-IgM ELISA Kit

            小鼠谷氨酸脫羧酶自身抗體IgG(GAD-Ab-IgG)ELISA KitMouse glutamic acid decarboxylase autoantibody IgG,GAD-Ab-IgG ELISA Kit

            小鼠谷氨酸脫氫酶(GDH/GLDH)ELISA KitMouse Glutamate dehydrogenase,GDH/GLDH ELISA Kit

            小鼠孤腓肽(OFQ/N)ELISA KitMouse orphanin FQ/nociceptin,OFQ/N ELISA Kit

            小鼠鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)ELISA KitMouse Leptospira antibody(IgG)ELISA Kit

            小鼠高鐵血紅蛋白(MHB)ELISA KitMouse Methemoglobin,MHB ELISA Kit

            小鼠高爾基蛋白73(GP-73)ELISA KitMouse golgi protein 73,GP-73 ELISA Kit

            小鼠高半胱氨酸(Hcy)ELISA KitMouse Homocysteine,HCY ELISA Kit

            小鼠肝脂酶(HL)ELISA KitMouse hepatic lipase,HL ELISA Kit


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