*，干細(xì)胞mTeSR™1是文獻(xiàn)發(fā)表的hPSC培養(yǎng)基，cGMP級別且無需飼養(yǎng)層，引用文獻(xiàn)超過1500篇，被廣泛用于各種前沿的hPSC研究中，包括基因編輯和3D懸浮培養(yǎng)等。在接下來的幾期推送中，我們將推出hPSC維持培養(yǎng)專題，詳細(xì)介紹多能干細(xì)胞的維持培養(yǎng)、傳代、凍存和解凍等。
細(xì)胞在mTeSR™1培養(yǎng)的形態(tài)

未分化的人ES細(xì)胞和iPS細(xì)胞在mTeSR™1中培養(yǎng)，形成緊密的多細(xì)胞集落，具有清晰的邊界。細(xì)胞間緊密的堆積起來，具有高核質(zhì)比，且核仁顯著。健康的集落會(huì)無縫的融合起來，在中心有多層細(xì)胞，在相襯顯微鏡下觀察， 成緊密的細(xì)胞簇。mTeSR™1中培養(yǎng)的集落在Vitronectin XF™上生長時(shí)更緊密且更圓，而使用Corning® Matrigel®生長的集落則較為分散且形狀不規(guī)則。 在這兩種基質(zhì)上，自發(fā)性分化的特征表現(xiàn)為失去集落邊界的完整性，一個(gè)集落內(nèi)有不規(guī)則的細(xì)胞形態(tài)區(qū)域，或者出現(xiàn)其他的細(xì)胞類型等。

使用mTeSR™1進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)如何確定傳代時(shí)間

在mTeSR™1中培養(yǎng)的人ES和iPS細(xì)胞，當(dāng)大多數(shù)集落長得大，緊密，集落的中心比邊緣更致密的時(shí)候，就可以傳代了。使用其他培養(yǎng)基時(shí)集落形態(tài)會(huì)有所不同。在mTeSR™1中鋪板第4天，集落可能還沒有顯示非常致密的細(xì)胞堆積，但四天后，集落的密度和大小會(huì)迅速增加，同時(shí)在傳代之前的1-2天，集落的形態(tài)也會(huì)發(fā)生顯著的變化。

如果將集落傳代的太早或者太頻繁，在鋪板的時(shí)候，細(xì)胞聚集體也許會(huì)變得不貼壁，導(dǎo)致產(chǎn)率降低，而且細(xì)胞也可能會(huì)開始分化（出現(xiàn)其他的細(xì)胞種類和不同的形態(tài)）。如果傳代時(shí)間太晚，培養(yǎng)物可能會(huì)開始出現(xiàn)分化的跡象。大概會(huì)有24 - 48小時(shí)的*傳代時(shí)間窗口。如果出現(xiàn)較大的集落，并具有有致密的中心，需要在24小時(shí)內(nèi)傳代。

3. 試劑和材料的準(zhǔn)備

3.1 配制mTeSR™1*培養(yǎng)基

使用無菌操作制備mTeSR™1的*培養(yǎng)基（基礎(chǔ)培養(yǎng)基 + 5X 添加物）。下面的示例是配置500 mL的*培養(yǎng)基。如需準(zhǔn)備其他體積，請按照比例調(diào)整。
注意：在室溫（15 - 25°C）融解添加物和*培養(yǎng)基，或者2 - 8°C過夜融解。不可使用37°C 水浴解凍。

（1） 將mTeSR™1 5X 解凍添加劑并*混勻。
注意：一旦解凍，立即使用或者分裝并儲(chǔ)存于 -20°C，于 -20°C可存貯3個(gè)月。不要超過添加劑的有效期。分裝的添加劑融解后，立即使用。不可再次冷凍。

（2） 將100 mL 的mTeSR™1 5X添加劑加入到400 mL的mTeSR™1基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，*混勻。
注意：如果不立即使用，mTeSR™1*培養(yǎng)基可以在2 - 8°C存儲(chǔ)2周?；蛘叻盅b并儲(chǔ)存于 -20°C可達(dá)6個(gè)月。不可超過每個(gè)單獨(dú)組分的有效期。分裝的*培養(yǎng)基融解后，立即使用或者在2-8°C保存可達(dá)2周。不要重新冷凍。
如果干細(xì)胞是無菌制備，mTeSR™1*培養(yǎng)基可以立刻使用。如果需要，也可以用0.2 μm低蛋白濾器過濾。
1-acetoxy-5-deacetyl-baccatin I    ≥98%
2,3,5,4-tetrahydroxyl diphenylethylene-2-o-glucoside    ≥98%
20(22)-ene-PPD    ≥97%
20(S)-Ginsenoside C-K    ≥98%        
20(S)-Protopanaxadiol saponins    ≥98%        
Anemosapogenin    ≥98%        
25-OH-Protopanaxdiol    ≥97%
25-OH-Protopanaxtiol    ≥97%
2-O-galloylhyperin    ≥98%        
2-Hydroxyeupatolide    ≥97%        
3’-methoxy-5’-hydroxyisoflavone-7-O-β-D-glucoside    95%
4-Hydroxyisoleucine    ≥98% ≥97%
干細(xì)胞