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*、腫瘤耐藥細胞株的生長情況
胚胎干細胞性很高,可以分化成各種細胞,細胞株能夠傳到40-50代,但遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變。而細胞系是細胞傳至50代以后生存下來,細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變,并且?guī)в邪┳兊奶攸c。有可能在培養(yǎng)條件下無限增殖。安全性:所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細胞后,在倒置鏡下觀察整個細胞生長情況。
1.如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。
2.如果細胞已長滿,即可進行傳代培養(yǎng)。
第二、腫瘤耐藥細胞株的具體步驟如下:
1. 棄去培養(yǎng)液,用PBS洗1-2次。
2. 加1ml消化液于培養(yǎng)瓶中,倒放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,之后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶10-30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若干細胞大部分變圓,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。
第三、腫瘤耐藥細胞株的注意事項:
1.觀察細胞在低倍鏡下進行,否則不能準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B(tài)請在10X或20X物鏡下。
2.瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基,細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。
3.有些干細胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。
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