人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞；DLD-1圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞；DLD-1圖片
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  DLD-1 是1977-1979年間D.L. Dexter和同事分離的兩株結(jié)直腸腺癌細(xì)胞株中的一株。 在ATCC和其它地方進(jìn)行的DNA fingerprinting和染色體組型分析表明這株細(xì)胞與HCT-15 (CCL-225)相似，說(shuō)明這兩者是來(lái)自同一個(gè)人的不同克隆。 他們的遺傳起源可通過(guò)DNA fingerprinting證實(shí)，但染色體組型分析顯示它們?nèi)狈θ旧w標(biāo)記*改變或數(shù)目上*改變。 細(xì)胞的CSAp陰性(CSAp-)。 DLD-1 細(xì)胞的 p53 抗原表達(dá)呈陽(yáng)性(p53 抗原產(chǎn)生了一個(gè)C ->  
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法  消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 PN5
凍存條件  *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR  Amelogenin:X,Y；CSF1PO:11,12；D13S317:8,11；D16S539:12,13；D18S51:11,17；D19S433:14,16；D21S11:29,32.2；D2S1338:17,25；D3S1358:17；D5S818:13；D7S820:10,12；D8S1179:15；FGA:22；TH01:7,9.3；TPOX:8,11；vWA:18,19
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

PVDF 膜，0.45μm，13×20cm1張
非變性法蛋白沉淀試劑盒10 次
CAS59-30-3葉酸5g
胰蛋白酶干粉50g
131085-10親和素10mg
抑制與產(chǎn)生超氧陰離子自由基測(cè)試盒 ( 比色法 )50 T
6- 羥基多巴胺5g
K802 菌種1mL
121112-10Stbl3 感受態(tài)細(xì)胞0.1 mL×10
Tricine-SDS-PAGE 配膠液1000mL
乳酸過(guò)氧化物酶10mg
DNA ，pH5.2，3M 100mL
柱式血清血漿 RNAout50 次
100829-30中 pH 緩沖液套裝30 次
RNase-free CTAB 溶液 ,20%100mL
RNA  GuSCN( 異硫氰酸胍 )100g
DNA  SDS( 十二烷基硫酸 )100g
CAS66-22-8尿嘧啶5g
131134-100Percoll100mL
土壤 DNAout30 次
L- 賴氨酸鹽酸鹽25g
RNase-free Sarkosyl 溶液 ,10%100mLRaw264.7, 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞gersion
H9c2(2-1) (大鼠心肌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
TE-10(人食管細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
WI38/VA13(SV-40Z轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
Romas(人淋巴瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
A-498(人腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HFL1(人肺成纖維細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
小鼠腺英文名稱：EMT-6
Poly-D-lysine溶液規(guī)格：2mg
人胚肺成纖維細(xì)胞英文名稱：MRC-5
緩沖李氏菌增菌肉湯基礎(chǔ)添加劑/Buffered Listeria Enrichment Broth Supplement加入225ml緩沖李氏菌增菌肉湯基礎(chǔ)中5毫升國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
大鼠頜下腺上細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL