小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞；L Wnt-3A圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞；L Wnt-3A圖片
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  L-M(TK-) cells (ATCC CCL-1.3) 用Wnt-3A表達(dá)載體轉(zhuǎn)染并在含G418的培養(yǎng)基中篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株。 Wnt-3A基因編碼一個(gè)有變異的信號(hào)功效分泌性糖蛋白。 Wnt基因控制胚胎發(fā)過(guò)程中的許多模式形成和生長(zhǎng)事件。 這些細(xì)胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白。 它們是目前Wnt-3A條件培養(yǎng)基的來(lái)源。 由于這種條件培養(yǎng)基還包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，對(duì)于涉及Wnt-3A條件培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)有必要用其來(lái)源細(xì)胞株(ATCC CRL-2648)作對(duì)照。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；0.4 mg/ml G-418
傳代方法  消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 PN5
凍存條件  *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

SR 3677 （1 mg）N-[2-[2-（dimethylamino）ethoxy]-4-（1H-pyrazol-4-yl）phenyl]-2,3-dihydro-1,4-benzodioxin-2-carboxamide
CX-4945Silmitasertib； 5-[（3-chlorophenyl）amino]-benzo[c]-2,6-naphthyridine-8-carboxylic acid
Clinafloxacin （hydrochloride） （1 g）AM1091； 7-（3-ami-pyrrolidinyl）-8-chloro-1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolinecarboxylic acid
Pioglitazone （25 mg）5-[[4-[2-（5-ethyl-2-pyridinyl）ethoxy]phenyl]methyl]-2,4-thiazolidinedione
AB-FUBINACA isomer 5 （10 mg）N-（1-ami-oxobutan-2-yl）-1-（4-fluorobenzyl）-N-methyl-1H-indazole-3-carboxamide
（R）-nitro-Blebbistatin （25 mg）R-（
2,3-Ethylone isomer （hydrochloride） （10 mg）2,3-bk-MDEA isomer； 1-（benzo[d][1,3]dioxol-4-yl）-2-（ethylamino）propan-1-one, monohydrochloride
Fluorescent Substrate for Thioredoxin Reductase Activity Assay （1 ea）Fluorescent Substrate for Thioredoxin Reductase Activity Assay
小鼠腎組織核提取物Mouse Kidney Nuclear Extract （500 ug）
生物素標(biāo)記單甲基化組蛋白H3K36多肽Biotinylated Monomethyl Histone H3K36 Peptide （200 ul）
Z-VDVAD-FMK， Caspase-2抑制劑（氟甲基酮）Caspase-2 Inhibitor Z-VDVAD-FMK
4’，5，7-Trihydroxyisoflavone 7-glucoside， Genistein 7-glucoside， Genistein-7-O-β-D-glucopyranosideGenistin
Sunitinib Maleate， SU-11248， Sutent， PHA-290940AD， PNU-290940ADSunitinib Malate （Sutent）
Pam3CSK4 . 3HClPam3Cys-Ser-（Lys）4， Trihydrochloride
5-（6-Quinoxalinylmethylene）-2，4-thiazolidine-2，4-dionePI3-K
4-（3’-Chloroanilino）-6，7-dimethoxyquinazoline； Tyrphostin AG 1478AG 1478
3’-[α-Amino-p-methoxyhydrocinnamamido]-3’-deoxy-N，N-dimethyladenosine dihydrochloridePuromycin Dihydrochloride
RAD-001Everolimus
4-Iodo-3-nitrobenzamide； BSI-201Iniparib60801-30柱式腐殖酸清除劑30 次
SDS 溶液 ,10%，電泳100mL
DNase I 溶液1.5mL
BL21(DE3)pLysS 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10
植物線粒體總蛋白提取試劑盒50 次
CAS314-13-6埃文斯藍(lán)1g
90509-5包涵體中量純化試劑盒5次
章魚堿25mg
兩管式 RT-PCR 試劑盒 (AMV-Taq)50 次
15mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)1個(gè)
AICAR(AMPK 激活劑 )5mg
一站式 Blue Native PAGE 電泳套裝30 次
18-0750-500總抗氧化能力檢測(cè)試劑盒 (ABTS 法 )500 次
100812-100BLOTTO 溶液100mL
TH1 菌種1mL
非凍型組織 RNA 保存液100mL
二甲苯青1g
植物種屬鑒定 PCR Mix 4100 次
CAS9003-39-8聚乙烯吡咯烷酮 K360100g
100832-250四氮唑藍(lán) (NBT)250mg