雜交瘤細(xì)胞株；2G10E3說(shuō)明書(shū)【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱(chēng)雜交瘤細(xì)胞株；2G10E3說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞屬專(zhuān)利保藏，其特征特性尚未公開(kāi)。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶(hù)手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶(hù)提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

ILP2  抑制細(xì)胞凋亡樣蛋白2抗體規(guī)格: 0.2ml
PHD3  脯氨酸羥化酶抗體規(guī)格: 0.2ml
CCL1/TCA3/I-309  嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白CCL1抗體規(guī)格: 0.1ml
TYRO3/MER+SKY  受體酪氨酸激酶抗體規(guī)格: 0.2ml
Plexin B1  神經(jīng)叢蛋白B1抗體規(guī)格: 0.1ml
Caldesmon  鈣介質(zhì)素抗體規(guī)格: 0.1ml
SCN10A/NAV1.8  鈉通道蛋白10α抗體規(guī)格: 0.2ml
phospho-PFKL (Ser775)  磷酸化6磷酸果糖激酶抗體規(guī)格: 0.1ml
BMAL1  芳香烴受體核轉(zhuǎn)位蛋白樣1抗體規(guī)格: 0.1ml
Bcl2A1  BCL2相關(guān)蛋白A1抗體規(guī)格: 0.1ml
PAX1  配對(duì)盒基因1抗體規(guī)格: 0.1ml
BACE1/ASP2  β分泌酶抗體規(guī)格: 0.1ml
SGK3  絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶Sgk3抗體規(guī)格: 0.2ml
Mtp53(N235K N239Y)  突變型P53抗體規(guī)格: 0.1ml
AT1R/AGTR1  血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體規(guī)格: 0.1ml
DEAF1/Deformed Epidermal Autoregulatory Factor 1  畸形表皮自調(diào)節(jié)因子1抗體規(guī)格: 0.2ml
Ntn1  軸突導(dǎo)向因子1抗體規(guī)格: 0.1ml1mL        Protein G 瓊脂糖
Dam 甲基轉(zhuǎn)移酶    500U    120505-500
Sephadex G50 介質(zhì)    10mL    130997-10
1g        TCEP 鹽酸膦
1.5mL        電泳 TEMED
250mL        TBE 電泳液 ,10×
30 次        DNA 修復(fù)混合液 
中性親和素蛋白    10mg    131090-10
即用型多重 PCR 試劑盒    50 次    130605-50
25mg        脫氧核糖核酸酶 ( 牛胰 )
1mL        放酮溶液 ,100mg/mL
25g        甲叉雙丙烯酰胺
10μg        M13mp18DNA
apo- 轉(zhuǎn)鐵蛋白    10mg    CAS11096-37-0
即用型藍(lán)白 T 載體 E 型 ( 無(wú)啟動(dòng)子，無(wú) MCS)    20 次    120515-20
5g        嘌呤
5g        固藍(lán) RR 鹽
5g        金胺 O
5nmol        接頭 DNA(pSma I)
葡聚糖    50g    CAS9004-54-0
Rosetta-gami B(DE3) 菌種    1mL    12-206
Sidekick 1  細(xì)胞粘附分子伴侶蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
TRIB2  MAPK調(diào)控蛋白TRB2抗體規(guī)格: 0.2ml