小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；3T3-L1圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；3T3-L1圖片
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  3T3-L1是從3T3細(xì)胞（Swiss albino）中經(jīng)克隆分離得到的連續(xù)傳代的亞系。該細(xì)胞從快速分裂到匯合和接觸性抑制狀態(tài)經(jīng)歷了前脂肪細(xì)胞到脂肪樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)變。該細(xì)胞鼠痘病毒陰性；可產(chǎn)生甘油三酯，高濃度血清可增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  15%NBS
傳代方法  1：3傳代；3-4天一次
傳代情況 PN3
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體  68-72
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

Rabbit Anti-human IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗人IgG規(guī)格: 0.1ml
Hes5  發(fā)狀分裂相關(guān)增強(qiáng)子-5抗體規(guī)格: 0.2ml
HN1/ARM2  雄激素調(diào)節(jié)蛋白2抗體規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Goat IgG/RBITC  羅丹明標(biāo)記的兔抗羊IgG規(guī)格: 0.3ml
GYG1  糖原蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
MEPE  細(xì)胞外基質(zhì)磷酸化抗體規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Bovine IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗牛IgM規(guī)格: 0.1ml
GlyR alpha 1/2/3  甘氨酸受體alpha 1/2/3型抗體規(guī)格: 0.1ml
TET1/CXXC6  Ten-eleven轉(zhuǎn)運(yùn)基因1蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-Bov IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗牛IgG規(guī)格: 0.1ml
phospho-GATA1(ser310)  磷酸化珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體規(guī)格: 0.1ml
BRD1  BRD1蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-human IgM/PE  PE標(biāo)記的小鼠抗人IgM規(guī)格: 0.1ml
FoxP3  叉蛋白P3抗體規(guī)格: 0.1ml
TMEM147  跨膜蛋白147抗體規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Chicken IgG/Cy7  Cy7標(biāo)記的羊抗雞IgG規(guī)格: 0.1ml
APOC2  載脂蛋白C2抗體規(guī)格: 0.1ml
CADM2/IGSF4D/Cell adhesion molecule 2  細(xì)胞粘附分子2規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗小鼠IgG規(guī)格: 0.1ml
WASF1/WAVE 1  WAVE1蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml100mL        RNase-free CTAB 溶液 ,20%
30 次        超快非醇核酸沉淀劑
50 次        真菌 RNAout
10mL        絲裂 C 溶液 ,5mg/mL
ATP 檢測試劑盒    200 次     18-0010-200
DNA 異硫氰酸胍溶液，5M    100mL    100902-100
1000U        SP6 RNA 聚合酶
10 次        DNA 5’末端標(biāo)記試劑盒
1.5mL        酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )
1mL        JM101 菌種
p19siRNA 結(jié)合蛋白     1000U    130702-1000
0.5mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)    1個    120668B-1
15 次        絲狀真菌線粒體 DNAout
5次        大提柱式 DNA 清除劑
30 次        石蠟包埋組織 RNAout
5mL        AEBSF 溶液，10mg/mL
NdeI    400U    17-0150
顯影定影套裝    1套    130807-1
500mL        胎牛血清（北美特）