豚鼠胚胎細(xì)胞；104C1說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱豚鼠胚胎細(xì)胞；104C1說明書
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  104C1細(xì)胞初期源于2/N株豚鼠的胎組織，后來細(xì)胞群體用苯并芘(Benzopyrene)處理7天誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生惡性轉(zhuǎn)化，連續(xù)克隆后獲得傳代細(xì)胞系。細(xì)胞染色體保留2倍體特征，但接種豚鼠產(chǎn)生實(shí)體腫瘤。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  新生牛血清，10%
傳代方法  1：3~1：8
傳代情況 P32
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

 吉非羅齊    分子式：    250.33    分子量：     C15H22O3    英文名稱：    Gemifibrozil    CAS號(hào)：    25812-30-0    
 鹽酸利托君    分子式：    323.81    分子量：    C17H22ClNO3    英文名稱：    Ritodrine hydrochloride    CAS號(hào)：    23239-51-2    
 異葒草苷    分子式：        分子量：        英文名稱：    Isoorientin    CAS號(hào)：        
 異嗪皮啶    分子式：    222.197    分子量：    C11H10O5    英文名稱：    ISO -    CAS號(hào)：    486-21-5    
 他克莫司    分子式：    804.01816    分子量：    C44H69NO12    英文名稱：    Tacrolimus    CAS號(hào)：    104987-11-3    
 人參皂苷Ro    分子式：    957.10564    分子量：    C48H76O19    英文名稱：    Ginsenoside Ro    CAS號(hào)：    34367-04-9    
 連翹苷     分子式：    534.55    分子量：    C27H34O11    英文名稱：    Phillyrin    CAS號(hào)：    487-41-2    
 甘草酸    分子式：    822.93    分子量：    C42H62O16    英文名稱：    Licorice acid    CAS號(hào)：    1405-86-3    
 紫云英苷     分子式：    448.38    分子量：    C21H20O11    英文名稱：    Astragalin    CAS號(hào)：    480-10-4    
 白術(shù)內(nèi)酯 I    分子式：    230.30222    分子量：    C15H18O2    英文名稱：    Atractylenolide I    CAS號(hào)：    73069-13-3    
 顏料橙 5    分子式：    338.27    分子量：     C16H10N4O5    英文名稱：    Pigment Orange 5    CAS號(hào)：    3468-63-1100g    麥芽糖    
100 次    阿爾瑪藍(lán)細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒檢測(cè)試劑    
10mL    微量核酸沉淀劑    
1mL    JM109 種    
T4 RNA 連接酶    120421-1000    1000U
即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒    101219-300    300 次
1mL    微量 RNA 定量試劑盒    
0.1mL×10    HB101 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞    
25mg    嘌呤鹽    
250 mL    Methacarn 固定液    
尿素    CAS57-13-6    100g
McCoy's5A 培養(yǎng)基 ( 含 1% 雙抗 )    19-0150-500     500mL
96 孔板血液 DNAout( 離心法 )    131194-1    1次
100mL    曲拉通 X-114    
10mg    DAPI 干粉    
5次    大提柱式質(zhì)粒 DNAout     
1000U    Taq DNA 連接酶    
芐瞇鹽    CAS1670-14-0    5g
EHA103 農(nóng)桿種    12-161    1mL
50 次    一管式病毒 DNA-RNAout    
10g    考馬斯亮藍(lán) R-250    
10mg    辣根過氧化物酶    
100mL    D/F12 培養(yǎng)基 ( 含 10% 胎牛血清 )    
50 次    柱式軟體 RNAout