犬胸腺細胞；cf2Th說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 犬胸腺細胞；cf2Th說明書
形態(tài)特性 
生長特性 貼壁
特征特性  該細胞為幾種逆轉(zhuǎn)錄病毒的敏感株，可用于擴增逆轉(zhuǎn)錄病毒。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  20%FBS
傳代方法  1:2-1:6，每周換液2-3次
傳代情況 
凍存條件  90%FBS+10%DMSO
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

 1,4-丁內(nèi)酯    分子式：    86.09    分子量：     C4H6O2    英文名稱：    1,4- butyl ester    CAS號：    96-48-0    
 1,2-二乙氧基乙烷    分子式：    118.17    分子量：     C6H14O2    英文名稱：    1,2- two ethylene oxide    CAS號：    629-14-1    
 二氯酞菁硅    分子式：    611.52    分子量：     C32H16Cl2N8Si    英文名稱：    Two chloride    CAS號：    19333-10-9    
 藥根堿    分子式：    338.38    分子量：     C20H20NO4    英文名稱：    Drug base    CAS號：    3621-38-3    
 吡嘧磺隆    分子式：    414.39    分子量：     C14H18N6O7S    英文名稱：    Pyrazosulfuron    CAS號：    93697-74-6    
 氟替卡松    分子式：    500.57    分子量：     C25H31F3O5S    英文名稱：    Fluticasone    CAS號：    90566-53-3    
 密滅汀A4    分子式：    542.7    分子量：    C32H46O7    英文名稱：    Mi A4    CAS號：    51596-11-3    
 梓醇    分子式：    362.33    分子量：    C15H22O10    英文名稱：    Catalpol    CAS號：    2415-24-9    
 鹽酸依立替康    分子式：    623.15    分子量：    C33H38N4O6.HCl    英文名稱：    Hydrochloric acid in accordance with    CAS號：    100286-90-6    
 五味子丙素    分子式：    384.428    分子量：    C22H24O6    英文名稱：    The C    CAS號：    61301-33-5    
 人參皂甙Rc    分子式：    1079.2685    分子量：    C53H90O22    英文名稱：    Ginsenoside Rc    CAS號：    11021-14-0    
 D(+)-五水棉子糖    分子式：    594.51    分子量：    C18H42O21    英文名稱：    D (+) - raffinose five water    CAS號：    17629-30-0    
 黃芩素    分子式：    270.24    分子量：    C15H10O5    英文名稱：    Huang Qinsu    CAS號：    491-67-8  伊紅 Y, 醇溶性    CAS15086-94-9    10g
磷酸化蛋白富集試劑盒    131066-10    10 次
1個    雜交管 (35×200mm)    
2mL    鏈霉親和素磁珠    
100 支    1000 μL RNase-free 藍吸頭 ( 盒裝已滅帶芯 )    
20μL    Ac-IETD-FMK(Caspase8Inhibitor)    
0.25mL    GTP 溶液，100mM    
總 SOD 活性檢測試劑盒 (WST 法 )    18-0710-100    100 次
DNA 探針變性液    131208-10    10mL
300U    TEV 蛋白酶    
10mL    非凍型血液 RNA 保存液    
25mg    多聚 -L- 賴氨酸 (7-15 萬 )    
100 次    哺乳動物種屬鑒定 PCR Mix    
聚乙烯醇    CAS9002-89-5    100g
Western 印跡膜抗體清除劑    80813-50    50mL
RNase 抑制劑 ( 人源 )    3290-400    400U
5g    牛血紅蛋白    
1mL    AH109 酵母種    
1mg    Quin-2AM    
100mL    沉淀型 TMB 顯色試劑盒    
SPQ(6- 甲氧基 -N-(3- 磺丙基 ) 喹啉 )    22-0580-25    25mg