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當(dāng)前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>ATCC細胞>>其他源細胞>> 大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細胞;BOS-5說明書
參 考 價 | 面議 |
產(chǎn)品型號
品 牌ATCC
廠商性質(zhì)經(jīng)銷商
所 在 地上海市
更新時間:2017-01-23 14:30:02瀏覽次數(shù):320次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)秋行軍蟲卵巢細胞Sf9克隆株;SSf-aSuper Spodopter
蚊子幼蟲體細胞;Aedes albopictus clone C6/3
大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細胞;BOS-5說明書【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細胞;BOS-5說明書
形態(tài)特性 成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞系來源于一雌性大額牛與婆羅門牛雜交F1代的耳部皮膚組織,2010年由中科院昆明細胞庫建立。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理:
1、復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應(yīng)將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。 細胞到達客戶手中,1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi),吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
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250mg 噻唑蘭
50 次 DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)φX174 DNA/Hinc Ⅱ
50 次 柱式糞便 DNAout
1mL XL1-Blue 種
Klenow 片段 (3´ → 5´ exo-) 131235-200 200U
柱式 OLIGO 回收試劑盒 80401-50 50 次
1g 羧芐青
30 次 單細胞全基因組擴增試劑盒
30 次 一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 中 pH)
1000μL 組蛋白 3.1 小鼠單抗
核酸外切酶 T 130627-250 250U
海藻糖溶液,1.5M,PCR 130506-1.5 1.5mL
30mL 天凈沙核酸濃縮劑
1mL EGY48 酵母種
100mL 一管式 TMB 顯色液 A( 可溶型 )
24 次 凋亡 DNAout
N- 乙酰 -L- 半胱氨酸 CAS616-91-1 5g
兩棲類和爬行類動物種屬鑒定 PCR Mix 131128I-100 100 次
2000U XhoI
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