非洲綠猴腎細(xì)胞；CV-1說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 非洲綠猴腎細(xì)胞；CV-1說明書
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞
生長特性 貼壁生長
特征特性  CV-1細(xì)胞株源自成年雄性非洲綠猴的腎，用于Rous肉瘤病毒的轉(zhuǎn)染研究。  
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  胎牛血清，10%
傳代方法  消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 PN5
凍存條件  *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

EBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細(xì)胞（彝族）    英文名稱：        KM9304    
小鼠腺上細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
Annexin V-FITC/PI雙染法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒    規(guī)格：        100次以上    
小鼠艾氏腹水細(xì)胞    英文名稱：        EAC    
3% NaC1V-P半固體發(fā)酵管    BR    國產(chǎn)/進(jìn)口    20支    
人腎足突細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
Mtsb肉湯/改良胰蛋白胨大豆肉湯/改良胰酪胨大豆肉湯/改良胰酶大豆湯/Mtsb Broth With Novobiocin/Modified Tryptic Soy Broth    大腸桿菌O157選擇性增菌    國產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
人結(jié)腸長春新堿耐藥株    英文名稱：        HCT-8/V     
疊氮鈉葡萄糖肉湯/Azide Dextrose Broth    鏈球菌、腸球菌、糞鏈球菌的增菌培養(yǎng)    國產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
考馬斯亮藍(lán)R-250    10g        國產(chǎn)    
濾膜腸球菌瓊脂/M-腸球菌瓊脂/M-Enerococcus Agar    用于濾膜法或直接平板法，從自來水、食品或其他標(biāo)本中分離腸球菌    國產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
大鼠氣管上細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
沙氏1%葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基/Sabouraud,s 1% Dextrose Agar    上培養(yǎng)增菌的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，用于深淺部真菌的分離培養(yǎng)    國產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
TT(人甲狀腺導(dǎo)管細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
WPMY-1(人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
293ET(人胚腎細(xì)胞（SV40T和EBNA1基因修飾細(xì)胞）)    5×106cells/瓶×2            
大鼠淋巴管內(nèi)細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
H4-IIE(大鼠肝細(xì)胞 )    5×106cells/瓶×2            
梭菌培養(yǎng)基/Reinfored Medium For Clostridia    用于梭菌檢查    國產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
Tca-8113(人舌鱗細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
SNU-5(人胃細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2   生物素化的牛血清白蛋白    131094-25    25mg
Real-Time PCR 稀釋液    130816-1    1mL
1mg    U0126(MEK1/2 抑制劑 )    
250mL    非蛋白型 Western 封堵液    
125mg    博萊    
30μg    φX174RF Ⅱ DNA    
L- 精氨    CAS1119-34-2    25g
質(zhì)粒 ( 載體 ) 系列產(chǎn)品    60908-2    2μg
500mg    硝苯吡啶    
250mL    固相 RNase 清除劑    
250g    聚乙二醇 12000    
50 次    酵母 DNAout    
腐胺    CAS110-60-1    5g
SG1117 種    12-251    1mL
5次    一步法96 孔板單落質(zhì)粒DNAout( 離心法)    
100g    肌醇    
5mg    氨基喋呤    
100 次    蛋白折疊試劑盒    
羥基脲    CAS127-07-1    1g