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            上海谷研實業(yè)有限公司
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            小鼠棕色脂肪細(xì)胞

            參  考  價面議
            具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

            產(chǎn)品型號

            品       牌R&D/美國

            廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

            所  在  地上海市

            更新時間:2022-04-13 14:00:45瀏覽次數(shù):284次

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            供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
            貨號 GOY-01X1311 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
            主要用途 僅供科研使用
            小鼠棕色脂肪細(xì)胞公司其它各種產(chǎn)品大鼠血管緊張素1-7(ANG 1-7)elisa檢測試劑盒
            大鼠血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶(ACE)elisa檢測試劑盒
            大鼠血管緊張素II(ANG II)elisa檢測試劑盒
            大鼠血管緊張素II轉(zhuǎn)化酶(ACE II)elisa檢測試劑盒
            大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子 VEGF elisa檢測試劑盒

            培養(yǎng)操作:
            1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37水浴中迅速搖晃解凍,加 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
            2
            )細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
            1.
            棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
            2.
            1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
            3.
            6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
            4.
            將細(xì)胞懸液按 12 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
            3
            )細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
            1.
            細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
            2. 4 min 1000rpm
            離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識。
            3.
            將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

            圖片13.jpg

            產(chǎn)品屬性:

            產(chǎn)品名稱

            小鼠棕色脂肪細(xì)胞

            規(guī)格

            5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

            貨號

            GOY-01X1311

            名稱    小鼠棕色脂肪細(xì)胞
            2.組織來源:脂肪組織

            3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

            4.細(xì)胞簡介:

            小鼠棕色脂肪細(xì)胞分離自棕色脂肪組織;動物體內(nèi)存在棕色和白色兩種脂肪,白色脂肪堆積在皮下,負(fù)責(zé)儲存多余熱量;棕色脂肪負(fù)責(zé)分解引發(fā)肥胖的白色脂肪,將后者轉(zhuǎn)化成二氧化碳、水和熱量,本身不儲存熱量。棕色脂肪組織呈棕色,其特點(diǎn)是組織中有豐富的毛細(xì)血管,脂肪細(xì)胞內(nèi)散著許多小脂滴,線粒體大而豐富,核圓形,位于細(xì)胞中央,這種脂肪細(xì)胞也稱為多泡脂肪細(xì)胞。棕色脂肪組織在成年動物極少,新生兒及冬眠動物較多,在新生兒主要分布在肩胛間區(qū)、腋窩及頸后部等處。棕色脂肪組織僅在嬰兒時期發(fā)揮作用,它們堆積在新生兒肩胛處,幫助維持體溫。隨著年齡增長,棕色脂肪會逐漸消失。終,動物體內(nèi)只殘存少量棕色脂肪細(xì)胞,分布于頸部和鎖骨。脂肪細(xì)胞分為白色脂肪細(xì)胞和褐色(棕色)脂肪細(xì)胞,常呈白色,在嬰幼兒期大量增殖,到青春期數(shù)量達(dá)到,此后數(shù)量一般不再增加。細(xì)胞內(nèi)含有大量富含脂肪的小泡,稱為脂質(zhì)泡,富含光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。此外,還有一種褐色脂肪細(xì)胞,在動物體內(nèi)主要存在于肩胛骨間、頸背部、腋窩、縱隔及腎臟周圍,含有高度團(tuán)縮的褐色脂肪,作用是將脂質(zhì)分解產(chǎn)熱,調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)比例。

            5.方法簡介:

            公司實驗室分離的小鼠棕色脂肪細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

            6.質(zhì)量檢測:

            公司實驗室分離的小鼠棕色脂肪細(xì)胞經(jīng)油紅O染色檢測,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

            7.培養(yǎng)信息:

            培養(yǎng)基 FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin

            換液頻率 2-3天換液一次

            生長特性 貼壁

            細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

            傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群

            消化液 0.25%

            培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%CO2,5%

            實驗報告:
            產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng):
            1
            、無菌條件下,取出1-3d SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將成1mm3左右大小;
            2
            、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4放置;
            3
            、剩下的組織再加入34mL酶消化液,混懸10s,置37消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
            4
            、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10 FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37 ,5CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
            5
            、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
            二、免疫熒光鑒定:
            1
            、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min
            2
            、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4條件下,用0.1Triton X-100透膜15min;
            3
            、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min
            4
            、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
            5
            PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37條件下放置1h;
            6
            、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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            冷凍保存細(xì)胞之方法?
            冷凍保存方法一: 冷凍管置于4 30~60 分鐘-20 30 分鐘* → -80 16~18 小時(或隔夜)液氮槽vaporphase 長期儲存。
            冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 –80 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。


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