名稱    小鼠真皮微血管內(nèi)皮細胞
2.組織來源：皮膚組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

小鼠真皮微血管內(nèi)皮細胞分離自真皮組織；真皮，位于表皮深層，向下與皮下組織相連，真皮結(jié)締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起，埋于基質(zhì)內(nèi)。其內(nèi)分布著各種結(jié)締組織細胞和大量的膠原纖維彈性纖維，使皮膚既有彈性，又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網(wǎng)狀層。真皮的結(jié)構(gòu)組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質(zhì)。微血管內(nèi)皮細胞（MEC）在炎癥反應(yīng)、腫瘤生長、創(chuàng)面愈合過程中起著非常重要的作用。在創(chuàng)面愈合研究領(lǐng)域，由于表皮細胞、真皮成纖維細胞體外培養(yǎng)技術(shù)的成熟，人們對這兩種細胞早已進行了大量深入的研究。與之相比，對參與創(chuàng)面愈合過程的另一種主要細胞——真皮微血管內(nèi)皮細胞，則因其體外分離培養(yǎng)技術(shù)的困難而使相關(guān)的研究受限。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠真皮微血管內(nèi)皮細胞采用膠原酶-中性混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的小鼠真皮微血管內(nèi)皮細胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
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細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。

圖

使用方法：
收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%胰消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

十二烷基磺酸清除劑25mL  MM1-43(FM®1-43)1mg

β- ，蛋白級10mL  Mito-Tracker Green( 線粒體綠色熒光探針 )50μL

DTT，蛋白級5g  miRNA 熒光定量檢測試劑盒25 次

DTT，免稱量蛋白級48 管  miRNA 尿素 -PAGE 上樣液 ,6×10mL

TCEP 鹽酸膦1g  miRNA 尿素 -PAGE 上樣液 ,6×1.5mL
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