產(chǎn)品屬性：

名稱    大鼠胸腺淋巴細(xì)胞
2.組織來源：胸腺組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

大鼠胸腺淋巴細(xì)胞分離自胸腺組織；胸腺是機體的重要淋巴器官，其功能與免疫緊密相關(guān)，是T細(xì)胞分化、發(fā)育、成熟的場所。其還可以分泌胸腺激素及激素類物質(zhì)，具內(nèi)分泌機能的器官。位于胸腔前縱隔。胚胎后期及初生時，是一生中重量相對大的時期。隨年齡增長，胸腺繼續(xù)發(fā)育；此后胸腺逐漸退化，淋巴細(xì)胞減少，脂肪組織增多。胸腺的結(jié)構(gòu)表面有結(jié)締組織被膜，結(jié)締組織伸入胸腺實質(zhì)把胸腺分成許多不*分隔的小葉。小葉周邊為皮質(zhì)，深部為髓質(zhì)。皮質(zhì)不*包圍髓質(zhì)，相鄰小葉髓質(zhì)彼此銜接。皮質(zhì)主要由淋巴細(xì)胞和上皮性網(wǎng)狀細(xì)胞構(gòu)成，胞質(zhì)中有顆粒及泡狀結(jié)構(gòu)。網(wǎng)狀細(xì)胞間有密集的淋巴細(xì)胞。胸腺的淋巴細(xì)胞又稱為胸腺細(xì)胞，在皮質(zhì)淺層細(xì)胞較大，為較原始的淋巴細(xì)胞。中層為中等大小的淋巴細(xì)胞，深層為小淋巴細(xì)胞。從淺層到深層為造血干細(xì)胞增殖分化為小淋巴細(xì)胞的過程。皮質(zhì)內(nèi)還有巨噬細(xì)胞，無淋巴小結(jié)。髓質(zhì)中淋巴細(xì)胞少而稀疏，上皮性網(wǎng)狀細(xì)胞多而顯著。形態(tài)多樣，胞質(zhì)中有顆粒及泡狀結(jié)構(gòu)，為其分泌物，尚有散在的圓形的胸腺小體。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠胸腺淋巴細(xì)胞采用機械研磨法結(jié)合密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為1×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的大鼠胸腺淋巴細(xì)胞經(jīng)過檢測，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細(xì)胞形態(tài) 圓形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
擬康氏木霉   產(chǎn)酸克雷伯氏菌

屎腸球菌凍干粉   短裙竹蓀東北變種

溶藻細(xì)菌   清酒酵母

蘇云金芽胞桿菌蠟螟亞種 Bacillus thuringiensis subsp. galleriae   德巴利酵母 Debaryomyces occidentalis

玫煙色擬青霉   梭形芽胞桿菌 Bacillus fusiformis
大鼠抑瘤素M受體(OSMR)elisa檢測試劑盒

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