【友情提示】：本產品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失，請仔細閱讀購買說明！
產品名稱：土壤漆酶微量法測試盒
規(guī)格 : 100管/48樣
測試方法: 微量法
貨號：GOY-01S6867
分類：土壤系列
商品介紹：
漆酶（Laccase）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高等植物中，具有較強的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環(huán)境污染物降解和木質纖維素降解以及生物檢測方面有非常廣泛的應用。

測定原理

漆酶分解底物ABTS產生ABTS自由基，在420nm處的吸光系數(shù)遠大于底物ABTS，測定ABTS自由基的增加速率，可計算得漆酶活性。

自備實驗用品及儀器

天平、常溫離心機、可見分光光度計、微量石英比色皿、震蕩儀。
試劑的組成和配制
提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑二：液體18μL×1瓶，4℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑四：液體50mL×1瓶， 4℃保存；
測定步驟
1、 分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10分鐘。
3、 加樣表：

樣本的前處理
①總FBP酶提取：建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離：按照植物組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一），冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測定胞漿FBP酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測定葉綠體中FBP酶活性。
建議測定總FBP酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP，則按照步驟②提取粗酶液。
環(huán)腺苷酸應答元件結合蛋白H抗體     糖代謝相關蛋白1抗體

鈣離子通道a1F亞型抗體     唐氏綜合征細胞粘附分子抗體

鈣調0酸酶B亞基B1抗體     碳酸氫協(xié)同轉運蛋白4-A7抗體

鈣調蛋白激酶激酶α抗體CaMKKα     碳酸氫協(xié)同轉運蛋白4-A4突變型抗體

透明質酸結合蛋白1抗體     碳酸氫協(xié)同轉運蛋白4-A4抗體
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土壤漆酶微量法測試盒LPS(TLR4 激活劑 )0.5mg  ATP 溶液，100mM0.25mL

LY294002(PI3K 抑制劑 )1mg  APMSF 溶液，10mg/mL1mL

Metformin(LKB1-AMPK 激活劑 )1g  AP 標記的抗抗體10μL

MG-132(Proteasome 抑制劑 )1mg  AMV cDNA 第一鏈合成試劑盒30 次

Monensin ( 蛋白轉運抑制劑 )100mg  Aminoally-dUTP 溶液，10mM100μL
FBP活性計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總：反應體系總體積，1×10-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。