蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質粒轉染到細胞中，通過瞬時表達產生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

交付內容：純化好的目標蛋白及純化報告。可按客戶要求提供含純化標簽（Tag）或切除純化標簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達90%以上。

產品屬性：

產品名稱：丙酮酸激酶同工酶R/L(PKLR)重組蛋白人

英文名稱：Recombinant Pyruvate kinase isozymes R/L (PKLR)

PK; PyK; PK1; PKL; Pyruvate Kinase Isozymes R/L; Glutamic--pyruvic transaminase 1; R-type/L-type pyruvate kinase; Red cell/liver pyruvate kinase

型號：GOY-01D131

酶與激酶

代謝通路

物種：Homo sapiens (Human，人)

來源：原核表達

宿主E.coli

內毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位：：n/a

預測分子量：25.2kDa

實際分子量：28kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標簽：Ile219~Met420 (Accession # P30613) with

緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性狀：凍干粉

純度：> 95%

等電點：6.1

應用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

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操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管，離心10000轉/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉移至新的預冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細胞洗滌后，轉至新的預冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

公司正在出售的產品：

9號染色體開放閱讀框64抗體 C9orf64

9號染色體開放閱讀框62抗體 C9orf62

9號染色體開放閱讀框66抗體 C9orf66

9號染色體開放閱讀框68抗體 C9orf68

9號染色體開放閱讀框7抗體 C9orf7

9號染色體開放閱讀框71抗體 C9orf71

K-酪蛋白抗體 Casein Kappa

20號染色體開放閱讀框26抗體 C20orf26

二硫鍵氧化還原酶鋅指蛋白5抗體 CXXC5

L-型電壓依賴型鈣通道β抗體 CACNB2

C2CD4D蛋白抗體 C2CD4D

過氧化氫酶抗體 Catalase

丙酮酸激酶同工酶R/L(PKLR)重組蛋白人葡糖桿菌屬 Gluconobacter sp.小腸結腸炎耶爾森氏菌 Yersinia enterocolitica

根瘤菌QSG-7701(人正常肝細胞)

貓腎上皮細胞CA46(人Burkitts淋巴瘤細胞)

漢遜德巴利酵母 Enterobacter cloacea酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis

根瘤菌 Rhizobium sp.酒假絲酵母 Candida kefyr

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum金耳 Tremella aurantialba

肝細胞HBV病毒株枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis

毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes異常漢遜酵母 Hansenula anomala

豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vignaBCIP/NBT KitBCIP/NBT堿性磷酸酶顯色試劑盒

屎腸球菌 Enterococcus faeciumGC-1, 鼠原細胞

苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

暗黑橄欖鏈霉菌 Streptomyces atroolivaceus釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

小鼠角膜內皮細胞培養(yǎng)基百脈根根瘤菌 Rhizobium loti