蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過(guò)親和，離子交換，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過(guò)Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。

交付內(nèi)容：純化好的目標(biāo)蛋白及純化報(bào)告。可按客戶要求提供含純化標(biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達(dá)90%以上。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱：丙酮酸激酶同工酶R/L(PKLR)重組蛋白大鼠

英文名稱：Recombinant Pyruvate kinase isozymes R/L (PKLR)

PK; PyK; PK1; PKL; Pyruvate Kinase Isozymes R/L; Glutamic--pyruvic transaminase 1; R-type/L-type pyruvate kinase; Red cell/liver pyruvate kinase

型號(hào)：GOY-01D133

酶與激酶

代謝通路

物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)

來(lái)源：原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)

亞細(xì)胞定位：：n/a

預(yù)測(cè)分子量：-

實(shí)際分子量：-(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書)

片段與標(biāo)簽：N-terminal His Tag

緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性狀：凍干粉

純度：> 97%

等電點(diǎn)：-

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關(guān)產(chǎn)品：

英文名稱：Recombinant Arachidonate Lipoxygenase 3 (ALOXE3)  產(chǎn)品名稱：花生四烯酸脂加氧酶3(ALOXE3)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Acid Phosphatase 2, Lysosomal (ACP2)  產(chǎn)品名稱：溶酶體酸性磷酸酶2(ACP2)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Kallikrein 2 (KLK2)  產(chǎn)品名稱：激2(KLK2)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant N-Acetyl Alpha-D-Glucosaminidase (NAGLU)  產(chǎn)品名稱：N-乙酰α-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGLU)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Ribonuclease III, Nuclear (RNASEN)  產(chǎn)品名稱：核糖核酸酶Ⅲ(RNASEN)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Ribonuclease L (RNASEL)  產(chǎn)品名稱：核糖核酸酶L(RNASEL)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

公司正在出售的產(chǎn)品：

細(xì)胞色素P450 17抗體 CYP17

碳酸酐酶9抗體 Carbonate dehydratase IX

細(xì)胞色素P450 7A1抗體/7a羥化酶 CYP7A1

24羥化酶抗體 CYP46

乳腺腫瘤新因子1抗體 CHRDL2

25α7羥化酶抗體 CYP7B1

細(xì)胞角蛋白3+12抗體 Cytokeratin 3+12

接頭蛋白CrkL抗體 Crkl

細(xì)胞色素P450 2R1抗體 CYP2R1

銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體 COMMD10

細(xì)胞色素P450 24A1抗體 CYP24A1

鈣周期素結(jié)合蛋白抗體 CACYBP

丙酮酸激酶同工酶R/L(PKLR)重組蛋白大鼠小鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞培養(yǎng)基光帽鱗傘 Pholiota nameko

NIH3T3全細(xì)胞裂解液大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)ACHN(人腎細(xì)胞)

植物桿菌 Lactobacillus plantarum粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe

柱孢綠僵菌 Metarhizium eylindrosporae

人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

小鼠膀胱平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

人大細(xì)胞肺細(xì)胞苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti

801-D (人巨細(xì)胞性肺細(xì)胞)恒河猴腎細(xì)胞

酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactisA549/DDP, 人肺腺耐藥細(xì)胞株

異常畢赤酵母 Pichia anomala銅綠假單胞菌 Pseudomnas aeruginose

香菇 Lentinula edodes

MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞)5×106cells/瓶×2