蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過(guò)親和，離子交換，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過(guò)Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。

交付內(nèi)容：純化好的目標(biāo)蛋白及純化報(bào)告?？砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶?biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達(dá)90%以上。

產(chǎn)品屬性：

英文名稱：Recombinant Endothelial NOS (eNOS)

NOS3; ECNOS; NOS III; E-NOS; C-NOS; ENOS; CNOS; Constitutive NOS; Nitric Oxide Synthase 3, Endothelial

型號(hào)：GOY-01D357

酶與激酶

心腦血管

物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)

來(lái)源：原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)

亞細(xì)胞定位：：n/a

預(yù)測(cè)分子量：14.3kDa

實(shí)際分子量：15kDa(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書(shū))

片段與標(biāo)簽：Glu888~Pro1001 (Accession # P70313) with

緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性狀：凍干粉

純度：> 95%

等電點(diǎn)：-

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關(guān)產(chǎn)品：

英文名稱：Recombinant 15-Lipoxygenase-2 (15-LO-2)  產(chǎn)品名稱：花生四烯酸-15-脂加氧酶B(15-LO-2)重組蛋白物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)

英文名稱：Recombinant Superoxide Dismutase 1 (SOD1)  產(chǎn)品名稱：超氧化物歧化酶1(SOD1)重組蛋白物種：Ovis aries; Ovine (Sheep，綿羊)

英文名稱：Recombinant SCO Cytochrome Oxidase Deficient Homolog 2 (SCO2)  產(chǎn)品名稱：SCO細(xì)胞色素氧化酶缺陷同源物2(SCO2)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Trehalase (TREH)  產(chǎn)品名稱：海藻糖酶(TREH)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant TTK Protein Kinase (TTK)  產(chǎn)品名稱：TTK蛋白激酶(TTK)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Glutaredoxin 3 (GLRX3)  產(chǎn)品名稱：谷氧還蛋白3(GLRX3)重組蛋白物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)

操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

公司正在出售的產(chǎn)品：

補(bǔ)體C3b-α鏈抗體 Complement C3b alpha' chain

補(bǔ)體C3b抗體 Complement C3 beta chain

CD3抗體 CD3E

著絲粒蛋白C1抗體 CENPC1

細(xì)胞分裂周期相關(guān)蛋白 CDCA7

豬瘟病毒抗體 CSFV

16號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框72抗體 C16orf72

補(bǔ)體C4 γ 鏈蛋白抗體 Complement C4 gamma chain

補(bǔ)體C4b-A蛋白抗體 C4b-A

磷酸化整合素β2/Integrin β2抗體 Phospho-CD18 (Thr758)

補(bǔ)體C4d-A蛋白抗體 C4d-A

磷酸化整合素β2/Integrin β2抗體 Phospho-CD18 (Ser756)

內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)重組蛋白小鼠ES-2(人卵巢透細(xì)胞細(xì)胞)大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vignaNCI-H2227(人小細(xì)胞肺細(xì)胞)

屎腸球菌 Enterococcus faeciumNIH/3T3, 小鼠成纖維細(xì)胞系

大鼠表皮黑色素細(xì)胞培養(yǎng)基釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

威爾酵母 Saccharomyces willianus毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes

Yeast Protein Extraction Kit/酵母蛋白抽提試劑盒羽扇豆根瘤菌 Bradyrhizobium lupini

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeAmmonium Persulfate(APS)

大鼠大隱靜脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基MDCK(犬腎細(xì)胞)

黃綠綠僵菌小孢變種 Metarhizium flavoviride var. minus大鼠脈絡(luò)膜血管細(xì)胞培養(yǎng)基

粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe植物桿菌 Lactobacillus plantarum

苜蓿中華根瘤菌植物桿菌 Lactobacillus plantarum

CaEs-17, 人食管細(xì)胞株苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti

灰色困難鏈霉菌 Streptomyces griseodifficilis家貓皮膚成纖維樣細(xì)胞