蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過瞬時表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。

交付內(nèi)容：純化好的目標(biāo)蛋白及純化報告?？砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶?biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達(dá)90%以上。

產(chǎn)品屬性：

英文名稱：Recombinant Endothelial NOS (eNOS)

NOS3; ECNOS; NOS III; E-NOS; C-NOS; ENOS; CNOS; Constitutive NOS; Nitric Oxide Synthase 3, Endothelial

型號：GOY-01D358

酶與激酶

心腦血管

物種：Sus scrofa; Porcine (Pig，豬)

來源：原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細(xì)胞定位：：Membrane, caveola. Cytoplasm, cytoskeleton. Golgi apparatus. Cell membrane

預(yù)測分子量：21.9kDa

實際分子量：21kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標(biāo)簽：Ala522~Phe705 (Accession # Q28969) with

緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性狀：凍干粉

純度：> 95%

等電點(diǎn)：6.1

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關(guān)產(chǎn)品：

英文名稱：Recombinant Phosphoinositide-3-Kinase Class 3 (PIK3C3)  產(chǎn)品名稱：磷酸肌醇-3-激酶3(PIK3C3)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Myosin Light Chain Kinase 3 (MYLK3)  產(chǎn)品名稱：肌球蛋白輕鏈激酶3(MYLK3)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Pyruvate Dehydrogenase Complex Component X (PDHX)  產(chǎn)品名稱：丙酮酸脫氫酶復(fù)合體成分X(PDHX)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Protein Kinase, AMP Activated Alpha 2 (PRKAa2)  產(chǎn)品名稱：AMP激活蛋白激酶α2(PRKAa2)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Protein Kinase, AMP Activated Beta 2 (PRKAb2)  產(chǎn)品名稱：AMP激活蛋白激酶β2(PRKAb2)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant WNK Lysine Deficient Protein Kinase 1 (WNK1)  產(chǎn)品名稱：WNK賴缺乏蛋白激酶1(WNK1)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

公司正在出售的產(chǎn)品：

陽離子通道精相關(guān)蛋白2抗體 CATSPER2

4號染色體開放閱讀框28抗體 C4orf28

陽離子通道精相關(guān)蛋白3抗體 CATSPER3

液泡蛋白分選蛋白VPS13A抗體 Chorein/VPS13A

鈣調(diào)磷酸酶B相關(guān)蛋白2抗體 Chp2

CHRAC1蛋白抗體 CHRAC1

ATP依賴的解螺旋酶抗體 CHD9

X染色體開放閱讀框6抗體 CXorf6

碳水化合物磺基轉(zhuǎn)移酶10抗體 CHST10

碳水化合物磺基轉(zhuǎn)移酶11抗體 CHST11

酶2抗體 CHSS2

碳水化合物磺基轉(zhuǎn)移酶12抗體 CHST12

內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)重組蛋白豬戊糖桿菌 Lactobacillus pentosusHela, 人宮頸細(xì)胞系

大鼠食管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

直絲紫鏈霉菌 Streptomyces rectiviolaceus 細(xì)胞名稱

嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilusHL-60, 人早幼粒白血病細(xì)胞

依維林鏈霉菌 Streptomyces iverini釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

香菇 Lentinula edodes凍膠假絲酵母 Candida gelida

顯影粉刺孢吸水鏈霉菌 Streptomyces hygrospinosus

NRK(大鼠腎細(xì)胞)粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe

蘇云金芽孢桿菌 Bacillus thuringiensis黑木耳 Auricularia auricula

亮白曲霉 Aspergillus candidus小鼠成骨細(xì)胞培養(yǎng)基

PBS圓弧青霉 Penicillium cyclopium

苜蓿中華根瘤菌炭黑曲霉 Aspergillus carbonarius

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum猴菌