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當前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>蛋白>>重組蛋白/RP>> 羧肽酶A1(CPA1)重組蛋白大鼠
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所 在 地上海市
更新時間:2023-03-08 16:29:43瀏覽次數(shù):166次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
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貨號 | GOY-01D791 | 應用領域 | 化工 |
主要用途 | 僅供科研實驗 | 英文名稱 | Recombinant Carboxypeptidase A1, Pancreatic (CPA1) |
物種 | Rattus norvegicus (Rat,大鼠) |
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 貨號 |
羧肽酶A1(CPA1)重組蛋白大鼠 | Rattus norvegicus (Rat,大鼠) | GOY-01D791 |
產(chǎn)品名稱:羧肽酶A1(CPA1)重組蛋白大鼠
英文名稱:Recombinant Carboxypeptidase A1, Pancreatic (CPA1)
酶與激酶
型號:GOY-01D791
物種:Rattus norvegicus (Rat,大鼠)
來源:原核表達
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細胞定位::n/a
預測分子量:27.7kDa
實際分子量:28kDa(差異分析請參閱說明書)
片段與標簽:Thr205~Tyr419 with
緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
性狀:凍干粉
純度:> 95%
等電點:-
應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg
蛋白表達及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中,通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。
2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清)。
3.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
交付內(nèi)容:純化好的目標蛋白及純化報告??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒?/span>Tag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達90%以上。
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產(chǎn)品名稱:谷氧還蛋白(GLRX)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人) 英文名稱:Recombinant Glutaredoxin (GLRX)
產(chǎn)品名稱:丙糖磷酸異構(gòu)酶1(TPI1)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人) 英文名稱:Recombinant Triosephosphate Isomerase 1 (TPI1)
產(chǎn)品名稱:轉(zhuǎn)酮醇酶(TKT)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人) 英文名稱:Recombinant Transketolase (TKT)
產(chǎn)品名稱:轉(zhuǎn)酶6(TGM6)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人) 英文名稱:Recombinant Transglutaminase 6 (TGM6)
產(chǎn)品名稱:胸苷嘧啶DNA糖基化酶(TDG)重組蛋白 物種:Homo sapiens (Human,人) 英文名稱:Recombinant Thymine DNA Glycosylase (TDG)
操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預冷的離心管,離心10000轉(zhuǎn)/分,4℃離心5 min;
4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;
2. 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4. 細胞洗滌后,轉(zhuǎn)至新的預冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
細胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,4℃離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。
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