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細(xì)胞系活性檢測(cè)方法之乳酸脫氫酶（LDH）釋放法

時(shí)間：2017/1/5閱讀：15035

LDH是活細(xì)胞漿內(nèi)酶，當(dāng)細(xì)胞損傷，細(xì)胞膜通透性變化時(shí)，會(huì)將LDH釋放到培養(yǎng)液中。因此培養(yǎng)液中該酶的活性與被裂解的細(xì)胞系數(shù)量成正比。由LDH催化的酶促反應(yīng)在催化乳酸生成丙酮酸的過(guò)程中使氧化型輔酶I（NAD）變成還原型輔酶I（NADH+H），后者再通過(guò)遞氫體一吩嗪二甲酯硫酸鹽（PMS）還原碘硝基氯化四氯唑（INT），INT接受氫離子被還原成紫紅色的化合物，酶標(biāo)儀檢測(cè)其OD值。與結(jié)晶紫染色法和MTT比色法進(jìn)行靈敏度、重復(fù)性和相關(guān)性比較，該法簡(jiǎn)便，靈敏度高，敏感性、客觀性、試劑成本及測(cè)定速度等都要優(yōu)于結(jié)晶紫染色法和MTT比色法。

LDH法常用于NK細(xì)胞系、CTL細(xì)胞活性檢測(cè)，從而評(píng)價(jià)機(jī)體免疫功能；與免疫常用方法Cr釋放法相比，操作省時(shí)和不存在同位素污染等優(yōu)點(diǎn)，引起人們很大興趣。但此法影響因素較多，諸如培養(yǎng)基、pH值、溫度及加底物顯色時(shí)間和終止劑等，實(shí)際操作不易掌握。

類似以上通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)酶活性的變化從而間接判斷細(xì)胞活性的方法還有很多，如酸性磷酸酶法（Acid phosphatasi assay，APA），利用酯酶的熒光素雙醋酸酯（FDA）法等。