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            上海研生實(shí)業(yè)有限公司
                                                                        
            
										  中級會員 | 第10年									
            
                                    								
            

							
            
						
            
                        

					
            
										
            
						
            
                            							
            
								
            
								
            
									
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            細(xì)胞
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            elisa酶聯(lián)免疫試劑盒
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            生化試劑
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            PCR試劑盒
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            標(biāo)準(zhǔn)品
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            PCR檢測試劑盒
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            質(zhì)粒
            
											
            
											
            
																						
            
											
            
																					
            
											
            定量PCR試劑盒
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            生化檢測試劑盒
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            科研細(xì)胞
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            天然蛋白、重組蛋白
            
											
            
											
											
            
																					
            
											
            抗體
            
											
            
											
											
            
																																						

							
            
                            						    
                            						
            



						



            
					
            
						
            培養(yǎng)原代細(xì)胞時哪些問題需要注意
            
						
            
							時間：2017/2/14閱讀：972
							
            
							
				
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            培養(yǎng)原代細(xì)胞時哪些問題需要注意
            1.原代細(xì)胞用1640加10%胎牛血清，有的種系用DMEM.血清要求質(zhì)量較高，在普通血清中細(xì)胞生長不太好。1640用雙蒸水溶解，按說明加入碳酸氫鈉。
            2.培養(yǎng)液中應(yīng)加入HEPES，起緩沖pH值的作用，否則會影響細(xì)胞狀態(tài)。如果用20%的HEPES，每次配培養(yǎng)液時每200ml培養(yǎng)液可加入5ml.加入HEPES后1640培養(yǎng)液顏色略呈橘黃色而非暗紅色。
            3.消化所用胰酶可選擇0.125%濃度，且不要消化時間太長。也有研究者認(rèn)為不用胰酶，直接吹打使細(xì)胞脫壁，但使用胰酶效果較好。消化時在鏡下觀察到原代細(xì)胞形態(tài)稍有變化即可，不要等形態(tài)明顯變化后再停止。可以不用加血清終止消化，只要將胰酶倒出來，加上培養(yǎng)液吹打即可。
            4.傳代密度不宜過高也不易過低，一般1瓶傳3瓶可能比較合適。
            5.培養(yǎng)液應(yīng)該適當(dāng)偏酸性，在7.0-7.2之間比較好。一般加上HEPES后，pH值是不用調(diào)的。
            6.細(xì)胞代數(shù)越高生長越快，同時性狀和原代差別也更大。一般2-3天傳代一次比較合適。
            7.傳代時原代細(xì)胞密度在80%左右比較好，如果超過90%融合再傳會影響細(xì)胞狀態(tài)。
            
							
							
							
						
            
					
            
				
            
			
            
		
            
		
		
		
		 



  
    
    				
			 
    
    

    

     
      
     
	 

 
	 
	
	
	

            
	
            
		
            
			
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