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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>人外周T細(xì)胞的分離與鑒定
材料:淋巴細(xì)胞株懸液、1%SRBC懸液、滅活之小牛血清、離心管、試管、吸管、載玻片、0.8%戊二醛、瑞氏染液。
方法
(1)取上述配好之淋巴細(xì)胞懸液0.1ml于潔凈小試管中,加入1%SRBC懸液0.1ml。再加入小牛血清0.1ml,混勻,置37℃水浴箱中5分鐘,500轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘,放4℃冰箱2-24小時(shí)。
(2)從冰箱中取出試管,留適量上清液,輕輕搖勻,加0.8%戊二醛2滴,輕搖后,置4℃冰箱15分鐘,取出,作成涂片,待自然干燥,以瑞氏染液染色。
(3)計(jì)數(shù):鏡下觀(guān)察,凡結(jié)合三個(gè)以上SRBC的T細(xì)胞株即為E-RFC,計(jì)數(shù)200個(gè)淋巴細(xì)胞,求出E-RFC占淋巴細(xì)胞總數(shù)的百分率。
結(jié)果
一般認(rèn)為E-RFC的正常值在60%以上,如少于50%則為低下。如欲分離T細(xì)胞,可用密度梯度離心,E-RFC因比重增大而沉于管底,與其他細(xì)胞株分離;用低滲法裂解花結(jié)中的SRBC,即可獲得純化的T細(xì)胞。
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