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凡混入原代細胞培養(yǎng)環(huán)境中對細胞生存有害的成分和造成細胞不純的異物都應(yīng)視為污染,細胞污染不能*被消除,但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴(yán)重性。細胞污染根據(jù)污染源主要可以分為物理性,化學(xué)性和生物性污染。
物理性污染的來源、危害及預(yù)防:物理性污染常常被人們所忽視或被籠統(tǒng)地歸為化學(xué)性污染。物理性污染通過影響細胞培養(yǎng)體系中的生化成分,從而影響細胞的代謝。培養(yǎng)環(huán)境中的物理因素,如溫 度、放射線、振動、輻射(紫外線或熒光)會對細胞產(chǎn)生影響。細胞、培養(yǎng)液或其它培養(yǎng)試劑暴露于放射線、輻射或過冷過熱的溫度中,可以引起細胞代謝發(fā)生改變,如細胞同步化、細胞生長受抑制甚至細胞死亡。通過實驗室 的合理設(shè)計及建立規(guī)范的操作規(guī)程,可以減少環(huán)境中物理因素對細胞的影響。孵箱應(yīng)放在溫度較恒定的環(huán)境中,周圍不能放置能引起機械振動的設(shè)備,如離心機。培養(yǎng)液及培養(yǎng)試劑應(yīng)放在固定的位置,為避免光照試劑不能放在玻璃門的冰箱中,試劑周圍不能放同位素。培養(yǎng)液從冰箱中取出后應(yīng)在室溫中放置一段時間后再進行實驗,以避免過冷的溫度對細胞的影響。
化學(xué)性污染的來源、危害及預(yù)防 :培養(yǎng)環(huán)境中許多化學(xué)物質(zhì)都可以引起細胞的污染 ?;瘜W(xué)物質(zhì)并不總是抑制細胞的生長,某些化學(xué)物質(zhì)如激素就可促進細胞的生長。不同細胞對化學(xué)物質(zhì)污染的反應(yīng)是不一樣的。未純化的物質(zhì)、試劑、水、血清、生 長輔助因子及儲存試劑的容器都可能成為化學(xué)性污染的來源。細胞培養(yǎng)的必需養(yǎng)分,如氨基酸,若濃度超過了合適的范圍,也會對細胞產(chǎn)生毒性。同樣,不同細胞系 其*培養(yǎng)條件下對血清和緩沖液的要求是不一樣的,在培養(yǎng)中應(yīng)嚴(yán)格控制。玻璃制品清洗過程中殘留的變性劑或肥皂(通常殘留在瓶蓋的內(nèi)表面)是zui常見的化學(xué)性污染。水是*一種在凝固時 膨脹的化合物。因此在選擇凍存細胞的容器時應(yīng)考慮到這個因素。容器因水的膨脹而發(fā)生破裂是引起試劑污染的重要原因。為了避免金屬離子、有機分子、細胞內(nèi)毒素等物質(zhì)對水的污染,在配制液體,清洗容器時必須使用不含雜質(zhì)的超純水 。需要注意的是,超純水放置過久其純度會下降。在高壓蒸氣滅菌及蒸餾水時水經(jīng)常被污染,因為高壓蒸氣鍋及純水機的常規(guī)維護后可能有少量的化學(xué)物質(zhì)殘留。為 了保證水的純度,我們應(yīng)采取措施盡量避免化學(xué)物質(zhì)的殘留。動物血清是原代細胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基,但血清又是潛在的生物及化學(xué)污染的來源。由于血清采集于多個動物,而且不同的工藝及質(zhì)量各不相同,因此血 清中許多成分的濃度存在很大的變異。血清對不同細胞的促生長能力及毒副作用取決于這些細胞的分化功能、組織來源及培養(yǎng)基的成分等因素。在進行一系列實驗 時,為了保證實驗的可重復(fù)性,選用同一批次的血清。培養(yǎng)液、培養(yǎng)附加成分、試劑 培養(yǎng)液、培養(yǎng)附加成分、試劑都可能成為化學(xué)性污染的來源。細胞培養(yǎng)使用的所有物質(zhì)都應(yīng)是高純度的,并經(jīng)過機構(gòu)的鑒定,實驗者本人也應(yīng)對上述成分進行 純度鑒定。同時,正確配置和儲存培養(yǎng)液及試劑也是非常重要的,應(yīng)該采取標(biāo)準(zhǔn)的操作步驟,避免液體體積計算錯誤,混用類似化合物等錯誤。
含量測定 丙酸睪酮 對照品 100008-199404 50mg
含量測定 醋酸氟輕松 對照品 100010-200507 50mg
鑒別 醋酸氯地孕酮 對照品 100011-198501 50mg
含量測定 醋酸潑尼松 對照品 100012-200105 100mg
UV法含量測定用 地高辛 對照品 100015-200308 30mg
含量測定 地塞米松磷酸鈉 對照品 100016-20011A 100mg
含量測定 氨苯甲酸 對照品 100017-200308 50mg
檢查 對乙酰氨基酚 對照品 100018-200408 1000mg
原代細胞
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