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            原代細胞判斷之形態(tài)學觀察法

            時間:2017/11/2閱讀:1161
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            原代細胞成活率,判斷之形態(tài)學觀察法:

            1、細胞內(nèi)出現(xiàn)顆?;蚩张?。

            2、細胞內(nèi)如果出現(xiàn)顆粒物質(zhì),表明細胞處于非健康狀態(tài)。

            3、同樣,細胞內(nèi)出現(xiàn)空泡也說明細胞處于非健康狀態(tài)。

             細胞喪失雙折射性:

                如果發(fā)生在單層細胞:一個具有雙折射性的正常細胞逐步失去這一特征(相差顯微鏡下細胞邊緣成暈環(huán)),則提示該細胞已經(jīng)死亡,即zui終干枯死亡。

                如果發(fā)生在懸浮細胞:正常懸浮細胞清晰透明,如胞內(nèi)出現(xiàn)顆?;蜃儨啙岜砻骷毎軗p,甚至死亡。

                怎樣去除死細胞?單層培養(yǎng)的細胞死亡后,一般會漂浮起來,因此不需要特殊處理。

            而懸浮細胞或原代培養(yǎng)細胞則要通過密度離心(如Ficoll梯度)方法收集死細胞。

            細胞成活率檢測實驗

            即刻檢測實驗——

            染料柜染實驗:原理——萘黑、臺盼藍以及很多其他染料均不能透過活細胞。概要——將細胞懸液與染料混勻,在低倍顯微鏡下檢查。材料包括無菌材料,即細胞;生長液;0.25%胰酶;PBSA.非滅菌材料即:血細胞計數(shù)板;生存力染料;巴斯德吸管;顯微鏡;手執(zhí)計數(shù)器。

            操作步驟:

            1、用胰蛋白酶消化或離心,重懸制備高深度的細胞懸液

            2、取一塊干凈的血細胞計數(shù)板,將蓋玻片固定在適當位置上。

            3、將一<滴細胞懸液和一滴(臺盼藍)或四滴(萘黑)染料混勻/li>

            4、加至血細胞計數(shù)板的計數(shù)室中。

            5、靜置1~2min(但不要放置很久,否則活細胞會受到損傷而吸收染料)。

            6、將計數(shù)板置于顯微鏡下,用10倍物境找到計數(shù)網(wǎng)格。

            7、計數(shù)細胞總及著色細胞的數(shù)目。

            8、清洗血細胞計數(shù)板,放入盒內(nèi)。

              原代細胞實驗分析-計算未著色細胞的百分數(shù),該數(shù)字即為本方法所得出的細胞生存力百分數(shù)。據(jù)統(tǒng)計,原代培養(yǎng)細胞成活率一般為50%~90%。細胞系一般為90%~100%存活。凍融細胞一般為50%~80%存。
            曲氟胸苷相關物質(zhì)A標準品        20mg    14599-46-3 
            曲康唑標準品    Terconazole    200mg    67915-31-5 
            曲米帕明標準品        25mg    315-69-5 
            曲司氯銨標準品    Trospium Chloride     100mg    10405-02-4 
            曲司氯銨相關物質(zhì)A標準品        20mg    76-93-7 
            曲沃前列素標準品        3ml    
            曲沃前列素雜質(zhì)標準品        1.5ml    
            去甲替林鹽酸鹽標準品    Nortriptyline Hydrochloride    200mg    894-71-3 
            去甲西泮標準品    Nordazepam CIV    50mg    1088-11-5 
            去羥米松標準品    Desoximetasone    200mg    382-67-2
            去氫膽酸標準品    Dehydrocholic Acid    200mg    81-23-2
            去氫孕酮標準品    Dydrogesterone    200mg    152-62-5
            原代細胞

             

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