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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>如何判斷原代細(xì)胞污染了?
狀態(tài) 1:原代細(xì)胞培養(yǎng)液變渾濁了,經(jīng)常見(jiàn)到是米湯樣,黃色液體,一般認(rèn)為細(xì)菌污染。
狀態(tài) 2:細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)含有能動(dòng)的小黑點(diǎn),一般認(rèn)為是黑膠蟲(chóng)。
狀態(tài) 3:胞培養(yǎng)基清亮,但是能看到飄在培養(yǎng)液帶有毛毛的白色的菌狀物質(zhì),有可能就是真菌感染。
策略:細(xì)胞污染了就直接扔了,還得把培養(yǎng)箱用酒精棉球擦干凈,并用紫外照射半小時(shí),防止再次污染。同時(shí)建議細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),在培養(yǎng)基中加入青鏈霉素 (尤其是初學(xué)者)
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,細(xì)胞周?chē)?xì)胞上有很多小黑點(diǎn),怎么辦?
策略 1:用胰酶消化下來(lái)后,低速短時(shí)間離心,不同實(shí)驗(yàn)室不一樣,如果平時(shí)是 1 000 轉(zhuǎn) 5 min 的話(huà),就可以改為 700 轉(zhuǎn) 3 min,用新的培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞,細(xì)胞收集是少一點(diǎn),但是一般都能干凈很多。多傳幾代就好多了。
策略 2:如果多次嘗試之后還是不干凈,就懷疑是否存在支原體污染了,用抗支原體藥就 OK 了。一般用上 3~5 天,細(xì)胞就干干凈凈了。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞表面沾了很多死細(xì)胞,傳代過(guò)程中一直存在怎么破?
有一招屢試不爽,那就是用 PBS 洗兩遍之后,加胰酶進(jìn)去,晃一晃,迅速將胰酶倒出,再用 PBS 洗一下,再加胰酶正常消化。死細(xì)胞由于粘附能力很弱,*次加胰酶進(jìn)去以后會(huì)掉下來(lái),第二次加胰酶下來(lái)的細(xì)胞才是活性比較強(qiáng)的原代細(xì)胞。整完一次之后,再次傳代方法同上,一般 2~3 次之后,細(xì)胞就完好如初了。
效價(jià)測(cè)定 FSH190IU、LH242IU/支 150524-200503 人絕經(jīng)尿促性素(HMG)
效價(jià)測(cè)定 21IU/支 050529-200902 縮宮素(合成)
免疫測(cè)定用 600μIU 150530-0312 促甲狀腺素(TSH)
免疫測(cè)定用 930mIU 150531-201003 促黃體生成激素(LH)
免疫測(cè)定用 9mIU/支 150532-0004 泌乳素
免疫測(cè)定用 450mIU/支 150533-0212 促卵泡生成素
免疫測(cè)定用 1.22mIU/0.61ug/支 534-9604 生長(zhǎng)激素
免疫測(cè)定用 240ng/0.5ml/支 150535-201002 人絨毛膜促性腺激素β亞單位
原代細(xì)胞
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