體外培養(yǎng)細胞無菌操作注意事項

【細胞培養(yǎng)前準備】

在開始實驗前要制定好實驗計劃和操作程序。有關數(shù)據(jù)的計算要事先做好。根據(jù)實驗要求，準備各種所需器材和物品、清點無誤后將其放置操作場所(培養(yǎng)室、超凈臺)內(nèi)，然后開始消毒。這可以避免開始實驗后．囚物品不全往返拿取而增加污染機會。

【操作野消毒】

無菌培養(yǎng)室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地面—次(拖布要)．紫外線照射消毒30-50min，超凈工作臺臺面每次實驗前要用75％酒精擦洗。然后紫外線淌毒30min。在工作臺面消毒時切勿將培養(yǎng)細胞和培養(yǎng)用液同時照射紫外線，消毒時工作臺面上用品不要過多或重疊放置．否則會遮擋射線降低消毒效果。—些操作用具如移液器、廢液缸、污物盒、試管架等用75%酒精擦洗后置于臺內(nèi)同時紫外線消毒。

【洗手和著裝】

原則上和外科手術相同。平時僅做觀察不做培養(yǎng)操作時，可穿裝細胞培養(yǎng)室內(nèi)紫外線照射30min的清潔工作服。在利用超凈臺工作時，因整個前臂要伸入箱內(nèi)，應著長袖的清潔工作服，并于開始操作前要用75％酒精消毒手。如果實驗過程中手觸及可能污染的物品和出入培養(yǎng)室都要重新用消毒液洗手。進入原代培養(yǎng)室需*洗手還要戴口罩、著消毒衣帽。

【火焰消毒】 

在無菌環(huán)境進行培養(yǎng)或做其它無菌工作時，首先要點燃酒精燈或煤氣燈。以后一切操作，如按裝吸管帽、打開或封閉瓶口等，都需在火焰近處并經(jīng)過燒灼進行。但要注意：金屬器械不能在為焰中燒的時間過長，以防退火，燒過的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織，以免造成組織損傷。吸取過營養(yǎng)液后的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管頭中營養(yǎng)液能燒焦形成炭膜，再用時會把有害物帶入營養(yǎng)液中。開啟、關閉長有細胞的培養(yǎng)瓶時，火焰滅菌時間要短。防止因溫度過高燒死細胞。另外膠塞過火焰時也不能時間長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細胞。

【操作】

進行培養(yǎng)時，動作要準確敏捷，但又不必太快，以防空氣流動，增加污染機會。不能用手觸及已消毒器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。為拿取方便，工作臺面上的用品要有合理的布局，原則上應是右手使用的東西放置在右側，左手用品在左側，酒精燈置于中央。工作由始至終要保持一定順序性，組織或細胞在未做處理之前，勿過早暴露在空氣中。同樣，培養(yǎng)液在未用前，不要過早開瓶；用過之后如不再重復使用，應立即封閉瓶口直立可增加落菌機會。吸取營養(yǎng)液、PBS、細胞懸液及其它各種用液時，均應分別使用吸管，不能混用，以防擴大污染或導致細胞交叉污染。工作中不能面向操作野講話或咳嗽，以免唾沫把細菌或支原體帶入工作臺面發(fā)生污染。操作前用酒精擦拭超凈臺面及雙手。手或相對較臟的物品不能經(jīng)過開放的瓶口上方，瓶口zui易污染，加液時如吸管尖碰到瓶口，則應將吸管丟掉。