細(xì)胞毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟

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1）在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。
2）分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如，兩性霉素B推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0，8.0mg/ml。
3）每天觀測細(xì)胞毒性指標(biāo)，如脫落，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓。
4）確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2－3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2－3代。
5）在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。
6）重復(fù)步驟4。
7）在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4－6代，確定污染是否以已被消除。



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