人乳腺癌細胞使用說明書：
運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：（1)干冰運輸，收到后 立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2)存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細 胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
細胞用途：僅供科研使用。

細胞培養(yǎng)步驟
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1. 準備L-15培養(yǎng)基(L-15:GIBC0,貨號41300039)，90%;胎牛血清，10%。
2.培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%。
3. 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

2)細胞處理：
復蘇細胞：將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加 入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補 加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢 查細胞密度。
細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培
養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部 分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止 消化。
按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分 鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者 瓶中。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL 培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的 新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細 胞懸液按1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄 去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約lml含血清的培養(yǎng)基后 加入凍存管中，再添加1〇%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞 收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走)，加 入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入1〇%DMSO后進行凍 存。

人乳腺癌細胞注意事項：
收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立 即與我們。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注 意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
細胞介紹
MDA-MB-435S是一種紡錘形的細胞，1976年由其親本(MDA-MB-435)中篩選得到。 MDA-MB-435是從一名31歲的轉移性乳腺導管腺癌女性患者胸水中分離得到的。 但近來證明MDA-MB-435細胞被M14黑色素瘤細胞污染。

細胞特性
1)來源：乳腺導管腺癌
2)形態(tài)：上皮細胞樣
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
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人乳腺癌細胞