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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>公司動(dòng)態(tài)>>細(xì)胞系自動(dòng)化篩選技術(shù)
zui常用的細(xì)胞系方法是檢測(cè)96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中蛋白的濃度;另外一個(gè)方法是讓細(xì)胞在軟瓊脂上生長(zhǎng)形成集落,然后利用原位免疫沉淀技術(shù)獲得高產(chǎn)細(xì)胞。近年來(lái),發(fā)展起來(lái)的高通量自動(dòng)化篩選技術(shù)也被受關(guān)注。
為實(shí)現(xiàn)克隆的高表達(dá),在有些情況下外源基因擴(kuò)增,比如以CHO用作宿主細(xì)胞;有些情況則不需要,比如雜交瘤細(xì)胞。為了實(shí)現(xiàn)外源基因的擴(kuò)增,將細(xì)胞在高濃度的擴(kuò)增標(biāo)記(比如dhfr)抑制劑的壓力下生長(zhǎng)。細(xì)胞存活需要擴(kuò)增標(biāo)記。高濃度的抑制劑能夠殺死除擁有多個(gè)擴(kuò)增標(biāo)記基因以外的絕大多數(shù)細(xì)胞。在標(biāo)記基因擴(kuò)增的過(guò)程中,與它相鄰的基因也隨之發(fā)生擴(kuò)增?;蚩截悢?shù)的增加導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的提高。在這個(gè)過(guò)程中,某些高產(chǎn)細(xì)胞株重組IgG重鏈的轉(zhuǎn)錄水平成為細(xì)胞內(nèi)zui高。另一方面,過(guò)高的蛋白表達(dá)可能會(huì)超過(guò)細(xì)胞內(nèi)蛋白折疊的限度,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中發(fā)生未折疊蛋白效應(yīng)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。因此沒(méi)有建立起與高表達(dá)相匹配的其它結(jié)構(gòu)的細(xì)胞可能不能存活。
基因擴(kuò)增后的細(xì)胞既含有多個(gè)拷貝的外源基因,能高水平的表達(dá)目的基因和抗性基因,還具備了強(qiáng)大的蛋白分泌能力。除此之外,高產(chǎn)細(xì)胞株還應(yīng)具備高密度培養(yǎng)和能維持較長(zhǎng)平臺(tái)期的能力。
基因擴(kuò)增后的細(xì)胞可以視為一個(gè)細(xì)胞“Pool”,其中含有眾多不同遺傳背景的細(xì)胞,或是基因插入位點(diǎn)的不同,或是擴(kuò)增程度的不同等等。因此基因擴(kuò)增后下一步是細(xì)胞的單克隆化。單克隆化是利用流式細(xì)胞儀或有限稀釋法或其他自動(dòng)化方式(0.2個(gè)細(xì)胞/孔)將細(xì)胞接種到多孔板中??梢哉J(rèn)為從某一特定孔里長(zhǎng)出的細(xì)胞都是由早期的一個(gè)細(xì)胞分裂而來(lái),他們?cè)谶z傳上是同源的。
單克隆化后需要對(duì)獲得的細(xì)胞系進(jìn)行初步的評(píng)價(jià)。主要包括生長(zhǎng)特性,產(chǎn)品質(zhì)量的評(píng)價(jià)。有些情況下需要將細(xì)胞馴化到更接近模式的條件下,進(jìn)行培養(yǎng)。
3x1.5ml Methyl Alcohol 67-56-1 甲醇標(biāo)準(zhǔn)品
4.5oz 氟化牙粉:氟化鈉/二氧化硅標(biāo)準(zhǔn)品
4.6oz 氟化牙粉:?jiǎn)畏姿徕c-碳酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品
4.6oz 氟化牙粉:?jiǎn)畏姿徕c/磷酸氫鈣標(biāo)準(zhǔn)品
400mg Zidovudine 30516-87-1 齊多夫定標(biāo)準(zhǔn)品
400mg Trehalose 6138-23-4 海藻糖標(biāo)準(zhǔn)品
400mg Tilmicosin 108050-54-0 替米考星標(biāo)準(zhǔn)品
400mg Sucralose 56038-13-2 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品
400mg Sodium Starch Glycolate Type B 9063-38-1 羧甲基淀粉鈉標(biāo)準(zhǔn)品(B型)
400mg Sodium Starch Glycolate Type A 9063-38-1 羧甲基淀粉鈉標(biāo)準(zhǔn)品(A型)
400mg Quinapril Hydrochloride 82586-55-8 鹽酸喹那普利標(biāo)準(zhǔn)品
400mg Octisalate (Octyl Salicylate) 118-60-5 水楊酸乙基己酯標(biāo)準(zhǔn)品
細(xì)胞系
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