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實驗方法原理 原代細胞融合的誘導物種類很多.常用的主要有滅活的仙臺病毒(Sendai virus),聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)和電脈沖。目前應用zui廣泛的是聚乙二醇,因為它易得、簡便,且融合效果穩(wěn)定。PEG的促融機制尚不*清楚,它可能引起細胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團發(fā)生結構重排。
實驗材料
雞紅細胞
試劑、試劑盒
PEGHanks液
儀器、耗材
顯微鏡離心機水浴箱離心管試管載玻璃片蓋玻片
實驗步驟 1. 取新鮮雞血以0.85%生理鹽水制成10%的懸液。
2. 稱取0.5克PEG(MW=4 000)放入試管內,在酒精燈上融化之,迅速加入0.5 ml 預熱的Hanks液混勻制成50%的PEG溶液。放入37℃水浴中待用。
3. 取上述10%的雞紅細胞懸液1 ml 放入離心管中,再加入5 ml Hanks液混勻,然后以1 000 rpm 離心5分鐘,小心棄去上清,用指彈法將細胞團塊彈散。
4. 取上述50%PEG溶液0.5 ml,在1分鐘內滴加到雞紅細胞懸液,邊加邊輕輕搖動混勻。待PEG全部加入后靜置1分鐘左右。此全部過程都要求在37℃水浴內進行。
5. 緩慢滴加9 ml Hanks液以終止PEG的作用,在37℃水浴內靜置5分鐘。
6. 離心棄上清后,取一滴融合后的細胞懸液滴片,加蓋片鏡檢。
7. 結果觀察:在高倍鏡下可以看到有兩個或兩個以上的雞紅細胞膜融合在一起,形成一個異核體細胞。要注意辨別融合細胞與重疊的雞紅細胞。
8. 融合率的計算:在高倍鏡下隨機計數200個細胞(包括融合的與未融合的細胞),以融合原代細胞(含兩個或兩個以上的細胞核的細胞)的細胞核數除以總細胞核數(包括融合與未融合的細胞核)即得出融合率。
Terconazole 200mg 曲康唑標準品 67915-31-5
Terfenadine 200mg 特非那定標準品 50679-08-8
Terfenadine Related Compound A 100mg 特非那定相關物質A標準品 76815-60-6
Terfenadine Related Compound B 50mg 特非那定相關物質B標準品
Terpin Hydrate 750mg 萜品標準品 2451/1/6
tert-Butylmethyl ether 1.2ml×3ampules 甲基叔丁基醚標準品 1634-04-4
Testolactone CIII 125mg 睪內酯酮標準品 968-93-4
Testosterone CIII 125mg 睪酮標準品 58-22-0
Testosterone Cypionate CIII 200mg 環(huán)戊丙酸睪酮標準品 58-20-8
Testosterone Enanthate CIII 200mg 庚酸睪酮標準品 315-37-7
Testosterone Propionate CIII 200mg 丙酸睪丸素標準品 57-85-2
原代細胞
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